溃疡性结肠炎肠黏膜通透性改变及其机制的临床和基础研究内科学专业论文.docxVIP

安徽医 安徽医科大学博士学位论文 5 5 2.2.4.2 实验分组和巴柳氮给药………………………………………47 2.2.4.3 疾病活动指数评分……………………………………………47 2.2.4.4 小鼠肠组织的大体观察和病理检查…………………………48 2.2.4.5 结肠匀浆检测 MPO、SOD、GSH-XP 活性和 MDA 含量…………49 2.2.4.6 小肠匀浆检测 TNF-α、IFN-γ水平…………………………53 2.2.4.7 小肠黏膜电镜检查……………………………………………54 2.2.4.8 小肠黏膜 E-钙粘蛋白和 VCAM-1 表达检测…………………54 2.2.4.9 小肠肠通透性检测……………………………………………55 2.2.5 数据及统计分析…………………………………………………55 2.3 MLCK 抑制剂对结肠炎小肠肠黏膜通透性的影响及其机制研究…55 2.3.1.实验动物…………………………………………………………55 2.3.2.材料与试剂………………………………………………………56 2.3.3 实验仪器…………………………………………………………57 2.3.4 实验方法…………………………………………………………58 2.3.4.1 结肠炎动物模型的建立………………………………………58 2.3.4.2 实验分组和 MLCK 抑制剂给药…………………………………58 2.3.4.3 疾病活动指数(disease activity index， DAI)评分………58 2.3.4.4 小鼠肠组织的大体观察和病理检查…………………………59 2.3.4.5 结肠匀浆检测 MPO 活性、TNF-α、IFN-γ、IL-13 和 IL-17 水平…………………………………………………………59 2.3.4.6 小肠黏膜电镜检查……………………………………………60 2.3.4.7 小肠肠通透性检测……………………………………………61 2.3.4.8 小肠黏膜 MLCK 蛋白免疫组织化学检测………………………61 2.3.4.9 小肠黏膜 MLCK 蛋白 Western blotting 检测…………………62 2.3.4.10 小肠黏膜 MLCK 活性 ELISA 检测………………………………62 2.3.5 数据及统计分析…………………………………………………63 3. 结果…………………………………………………………………63 6 6 3.1 溃疡性结肠炎患者肠黏膜通透性改变及其机制研……………… 63 3.1.1 乳果糖和甘露醇的 HPLC 测定方法学评价………………………63 3.1.1.1 方法的专属性…………………………………………………63 3.1.1.2 线性范围………………………………………………………64 3.1.1.3 重复性误差……………………………………………………66 3.1.1.4 回收率…………………………………………………………66 3.1.1.5 灵敏度…………………………………………………………66 3.1.1.6 HPLC测定方法学的临床评价…………………………………66 3.1.2 UC患者和对照者尿中乳果糖和甘露醇测定结果………………66 3.1.3 UC 患者肠黏膜超微结构改变……………………………………67 3.1.4 UC患者回肠上皮细胞MLCK蛋白表达分布………………………69 3.1.5 UC 患者回肠上皮细胞 MLCK 蛋白 Western blotting 检测……69 3.1.6 UC 患者回肠上皮细胞 MLCK 活性变化……………………………70 3.1.7 UC 患者通透性与临床资料分析…………………………………71 3.1.7.1 UC 患者 L/M 比值和 Sutherland DAI 评分相关分析…………71 3.1.7.2 UC 患者 L/M 比值和 ESR 相关分析……………………………72 3.1.7.3 UC患者L/M比值和CRP相关分析………………………………72 3.1.8 UC 患者肠黏膜通透性与 MLCK 活性相关分析……………………74 3.2 巴柳氮对结肠炎小鼠肠黏膜通透性的影响及其机制……………74 3.2.1 动物模型的建立 ………………………………………………74 3.2.1.1 一般状况………………………………………………………74 3.2.1.2 结肠组织的大体观察…………………………………………75 3.2.1.3 结肠组织的病理观察…………………………………………76 3.2.1.4 结肠组织匀浆 MPO 活性………………………………………77 3.2.1.5 结肠组织匀浆 SOD