拉坦前列素酸对人Tenon囊成纤维细胞CTGF和胶原合成的影响-眼科学专业论文.docx

是蔗太季博士论史本论文常羼缝略诩褒 是蔗太季博士论史 本论文常羼缝略诩褒 人Tenon囊成纤维细胞 human Tenon fibmblast HTF 拉超懿鞠素酸 latanoprost(free acid) LP。A 结缔组织生长因子 connective tissue growth factor CTGF 转化生长因子．B transforming growth factor—B TGF．8 盘小叛滋犍生长园子 platelet derived growth factor PoGF 前列腺索 prostaglandin PG 前列腺豢F受体 prostaglandin F receptor FP 置簋大争博士论文 置簋大争博士论文 稿妄 拉坦前歹q素酸对人Tenon囊成纤维细胞CTGF和胶原合成的影响 抗青毙靛滴眼液术酋长期应鬻霹造成结貘下细臆井基疆壤较和炎症纲胞增 多，促进青光眼手术滤过道的瘢痕化，降低抗脊光眼手术的成功率。拟前列腺素 类局部降眼压药正越来越多地应用于临床，拉坦前列素是同类酾物中应用最广‘泛 翦一静，鼹部长麓滚鼷对滤过遂瘢痰讫兹露蠲镰受#瑟科学者躲关注。 有研究认为，拟前列腺素药可促进体外培养的睫状体平滑肌细胞结缔组织生 长因子(connective tissue growth factor，CTGF)mRNA的表达，但此药对Tenon囊 成纤维缎胞CTGF的影响迄今未见报导。CTGF爨有健进成纤维缨胞有丝分裂、 合成分泌胶原稿薪生赢管形成的作蠲，楚近年薪发税的重要静壤纤维纯因子。因 此研究拟前列腺素类药物对Tenon囊成纤维细胞CTGF表达的影响具有临床现实 意义，有利于进一步了解药物对手术滤过道瘢痕形成的作用。 实验涯饔控蓬蘩梦|j索珂上调Tenon囊藏绎缭缀藏墓蒺金溪爨自酶懿表达，挺 进胶原和其它细胞外熬质的分解过程。胶原可以促进细胞移行、分化、粘附、增 殖及分泌细胞外基质，参与器官纤维化的过程。胶原沉积的数墩由胶原的分解和 台成两个过程决定，爨蘧该药对胶溅合成静影喻残秃报导。 本实验选爝无骑蹒裁豹拉遛前列豢酸于#蓐予俸外培养的人Tenon囊成纾维 细胞(human Tenon fibroblast，HTF)，研究拟前列腺素类药物对结缔组织生长因 子的影响及其在胶原合成中的作用。 第一酃分人Tenon囊成纤维细臆的体井培养及鉴定 于白内障手术中取患者的Tenon囊组织，采用组织块贴黩培养法行原代培 养。5％C0。、37℃条{牛下耀含10％胎牛血溥的低糖删隧传代培养。采用波形餐自 抗体、簸纾维细照撬体、角蛋自抗体，应矮免疫绷魔纯学染惫鄹免疫缩照荧光染 色方法对培养的细胞进行鉴定。 结粜： 壤养瓣缎邃生长瀵跃、洼获表现稳定，囊蛋囊抗傣柒整瓣瞧、波形蛋鑫靛蒋 染色阳性、成纤维细臆抗体染色阳性，确认是成纤维细胞。 第二部分拉坦前列豢酸对Tenon囊成纤维细胞CTGF mRN^和蛋白表达睫 影臻 1．于六孔培养板培养HTF细胞至完全融合后谶行实验。①观察不同浓度拉坦 ￡．冀太攀博士论吏 ￡．冀太攀博士论吏 摘要 前列素簸对HTF细胞CTGF mRNA表达的影响：实验分为6组(n=4)，第1～5组 势裂暖l驴～l()麓戆l=妻毽蓑列素酸楚理2天，繁6缀为鼹照缀。②鼹察不溺对l霹 拉坦前列索酸作用对HTF细胞CTGF mRNA表达的影响，实验分为6组(n=4)，第 1、3、5组分别用101M拉坦前列索酸作用24、48、72小时；第2、4、6组为对 照缝，第24、48、72小时收集缡鼹。用RT—PCR方法溅定CTGF勰凇表达。 2．缓胞接种于颓鬣盖玻片的24孔培养板，培养至完全融合。实验分为6 组，第1～5组分别以10一、lO。7、10一、10Ⅲ、10‘1 3 M的拉坦前列索酸处理2天， 第6组为对照组。用免疫细胞荧光染色检测CTGF蛋白的表达。 取宠全敲台瓣缨藏8瓶，分为2缝，繁i缝戮10。鲢豹控缝兹歹l素酸处理2 天，第2组为对照组。用免疫印逊测定细胞内CTGF蛋白的袭达。 3．采用FP受体抑制剂AL一8810观察CTGF mRNA和蛋臼的上调能否被阻 颤，磺究FP受体在圭曼缀蓠列素酸剡激HTF纲飚CTGF表达中粒终臻。 结鬃： 1．①10‘9M～104M拉坦前列索酸作用2天，药物干预组CTGF mlLNA表达 增加187％～265％(pO．05)，不阉浓度组之间无疆显差剐。②相对于对照缀， 10。麓控缝蓠舞素酸楚壤缀CTGF mRNA攀l天穗麓1804．29％(PO．01≥、第2 天增加166士25％(P0．01)、第3天增加59士27％(PO．0t)。 2．拉坦前列素酸作用2天，免疫荧光染色分析CTGF徵白表达：104M、 10’7M、lO+强l、10。1M浓度经分别上舞207±56％(pG．01