流感裂解灭活疫苗纯化工艺的开发-生物化工专业论文.docxVIP

大连理工大学硕士学位论文摘 大连理工大学硕士学位论文 摘 要 流感病毒具有高度的传染性，并能引起急性呼吸道传染疾病，它的流行特点是在短 期内突然爆发，迅速蔓延，造成不同程度的流行，其中包括世界大流行、局部流行暴发 及散发。它的发病率极高，并伴有很高的死亡率。目前尚无特效药，接种流感疫苗被认 为是预防流感发生与传播的最佳方法。 本文首先将H1Nl、H3N2、B三种不同型别的流感病毒(Influenza virus)分别接种 于普通鸡胚，经培养后，收获其病毒原液，然后进行超滤浓缩、纯化、裂解、二次纯化 及灭活等步骤，最后将三种型别的病毒液合并，制成疫苗，确定了一套较完整的流感裂 解灭活疫苗工艺。同时对该工艺中的两种纯化方法一蔗糖密度梯度离心与Sepharose 4FF层析进行了摸索、比较，最后从产业化角度考虑，确定了较佳的生产工艺。 对两种不同纯化方法得到的病毒原液进行质量分析，结果表明：用两种方法纯化后 的病毒液质量都达到WHO规定的要求。两者均可作为流感疫苗(Influenza Vaccine)的纯 化方法。但在卵清蛋白及杂蛋白去除方面，Sepharose 4FF层析法要稍好于蔗糖密度梯 度离心。层析法的卵清蛋白去除率可达到99．3％以上，蔗糖密度梯度离心法可达到97．5％ 上。杂蛋白去除率：Sepharose 4FF层析法的为89．2％以上；蔗糖密度梯度离心法的为 87．5％以上。而在回收率方面蔗糖密度梯度离心法为40。7％以上，Sepharose 4FF层析为 37。5％以上。由此可见蔗糖密度梯度离心法要高于Sepharose 4FF层析法。在细菌内毒 素去除方面，两神方法均达到WHO规定标准，且无大的差别。 鉴于产品开发要求，试验研究确定选用蔗糖密度梯度离心方法作为流感疫苗的纯化 手段。并对用该法纯化的流感病毒液进行了后序工作的研究，对研制的疫苗成品进行了 相关检测，其结果均符合WHO标准要求。 关键词：流感病毒：纯化；Sepharose 4FF屡析：蔗糖密度梯度离心；流感疫苗 流感裂解灭活疫苗纯化工艺的开发Development 流感裂解灭活疫苗纯化工艺的开发 Development ofPufified Technics for Influenza split inactivate Vaccine Abstract Influenza viru∞s have hi【gh infectiousness and Call cal．1se acute respiratory illness．Its epidemic feature is outbreak in short term and quickly spread．Influenza CallSCS various degree epidemics including pandemic,part．epidemic and diverging，yet causes considerable morbility and mortality．Now there is no specific medicine to prevent anyone from getting the flu,but vaccination is regarded as the best method ofinfluenza prevention． A complete technics of influenza split inactivate vaccine by the study of influenza VitllS嚣w瑟established in the article．First,the virus-containing virus fluids were harvesaed, after Influenza viruses ofHlNl，H3N2，B respeetivly propagated in embryonated chicken eggs and incubated，Then the Vilt塔-containing fluids was coneentrmed,purified,split,the second pudfied and inactivated．Finally the three types of influenza virus·containing fluids wefe affiIiated to vaccine．Furthermore the two puri西metheods of sucrose density gradient eentrifugation and Sepharose 4FF agarose chromatography w