淋巴瘤免疫组化和基因诊断标准化的初步研究-病理学专业论文.docxVIP

英文缩写词中英文对照表缩略词 英文缩写词中英文对照表 缩略词 英文全称 中文全称 HL Hoddgkin’s lymphoma 霍奇金淋巴瘤 NHL Non-Hodgkin’S lymphoma 非霍奇金淋巴瘤 ML Malignant lymphoma 恶性淋巴瘤 B·-cell—specific-activator B细胞特异性激活蛋 BSAP protein 白 PBS Phosphate buffer saline 磷酸盐缓冲液 DAB diaminobenzidine 二氨基联苯胺 Statistical package for the SPSS 社会科学统计软件包 socialscience 链霉亲和素一生物素 SABC Strept avidin-biotin complex 复合物 PCR Polymerase chain reactlorl 聚合酶链反应 IgH Immunoglobulin heavy chain 免疫球蛋白重链 PTCL periphereal T cell lymphoma 周围T细胞淋巴瘤 FL follicle center cell lymphoma 滤泡性淋巴瘤 弥漫性大B细胞淋巴 DLBcL m哗17趴d1 lymphoma 瘤 MZL 嗍嚣r 边缘区淋巴瘤 中文摘要目的恶性淋巴瘤(malignant 中文摘要 目的恶性淋巴瘤(malignant lymphoma，ML)是我国十大恶性肿瘤之 一，该肿瘤分类复杂、预后差、l临床诊断极为困难，误诊率高达30％。 目前，ML的诊断主要依靠HE组织形态学和免疫组化，国内部分大医院 己建立了以HE组织形态学为基础，免疫组化、基因诊断为辅的三结合的 恶性淋巴瘤诊断方案，确诊率达到95％以上。但目前免疫组化常用的 CD20、CD45R0和LCA等抗体受到多种因素的影响，可出现假阳性或假阴 性，迫切需要能在淋巴组织增生性疾病中稳定特异表达的标准化抗体； 基因诊断应用试剂未标准化，条件、方法不统一，阳性检出率报道不一， 结果不稳定，难于推广。针对上述问题，我们将在上述两个方面做进一 步的研究，首先，免疫组化方面比较B细胞特异性激活蛋白 (B～cel卜specific activator protein，BSAP)与CD20在淋巴组织增生 性疾病中的表达情况，论证BSAP成为临床鉴定淋巴瘤类型标准化抗体的 可能性：其次，基因诊断方面，比较使用95％酒精、10％福尔马林液、 中性缓冲甲醛液和4％多聚甲醛一0．1mol／L磷酸缓冲液等常用固定剂固 定新鲜淋巴组织后对其切片HE染色、组织DNA保存质量的综合影响，寻 找其最佳应用固定剂并明确其最佳应用温度及固定时间。 方法(1)观察63例淋巴组织增生性疾病的组织病理学形态，按WHO 新分类方案进行淋巴瘤分型，结合常规的CD45RO，采用免疫组织化学 SABC法同步检测比较BSAP和CD20的表达；(2)收集30例新鲜扁桃体 组织，应用95％酒精、1096福尔马林液、中性甲醛缓冲液和4％多聚甲醛 液等固定剂分别同时固定，石蜡包埋切片，HE染色，明确组织类型及比 较其染色效果；15例应用上述不同固定剂分别固定组织常温下(20．12) 不同时间段(1h、2h、4h、8h、24h、48h、72h)，另15例在不同应用温 度(-20℃、一4℃、20℃)下应用上述不同固定剂分别固定8h，组织消化 提取其DNA，量取其oD值并进行PCR凝胶电泳比较。 结果(1)63例淋巴组织增生性疾病中，9例淋巴结反应性增生的B 淋巴细胞，34例B细胞性淋巴瘤的瘤细胞均表达BSAP和CD20，但BSAP 的中等到强阳性表达率(69．8％)高于CD20(53．5％)，二者差异无显著 性(PO．05)，6例霍奇金淋巴瘤H，】娼瘤细胞表达阳性率为83．2％，14 例T细胞淋巴瘤的肿瘤细胞均不表达BSAP；(2)30例新鲜扁桃体组织分 例T细胞淋巴瘤的肿瘤细胞均不表达BSAP；(2)30例新鲜扁桃体组织分 别固定后，石蜡包埋组织切片HE染色辨认并比较，中性缓冲甲醛液和 10％福尔马林液固定组组织结构清楚，染色对比明显，95％酒精组组织 变脆，增加了切片难度，镜下观察组织容易变形：在7个应用时间段和 3个应用温度条件下，不同固定剂固定后提取DNA的OD值比较，四个 固定组及对照组在7个应用时间段和3个应用温度条件下DNA浓度和比 值均无显著性差异(pO．05)；4种固定剂组提取DNA在1h、2h、4h、 8h时段PCR扩增阳性率均为100％，95％酒精组DNA在7个时段阳性 率均为100％，中性缓冲甲醛液组在48h、72h时段阳性率有下降，分别 为93．3％、93．3％，4％多聚甲醛液和10％福尔马林液在24h、