山麦冬总皂甙的分离及其对缺血性脑损伤保护作用的实验研究-药理学专业论文.docxVIP

山麦冬总皂甙的分离及其对缺血性脑损伤保护作用的实验研究 山麦冬总皂甙的分离及其对缺血性脑损伤 保护作用的实验研究 硕士研究生：邓卅 指导教师：李卫平 教授 专业名称：药理学 摘 要 目的： 临床脑血管疾病具有很高的发病率，死亡率和致残率，其中尤以 脑缺血多见，严重威胁人类的生命安全和生活质量。目前，国内外尚 无十分理想的治疗药物。本实验采用大孔树脂法分离山麦冬(Radix Liriopes)中山麦冬总皂甙(Total sapoins ofLiriope Spicata lottr,TSL)， 分光光度法进行含量测定，并对其在缺血性脑损伤中的保护作用及可 能机制进行研究。 方法： 一．采用大孔树脂法提取并精制TSL水溶液，分光光度法测其含 量。 =．利用三氯化铁局部涂抹损伤血管形成大鼠大脑中动脉(MCA) 血栓方法制各大鼠局灶性脑缺血模型，观察不同剂量给药组对大鼠脑 缺血4小时后行为学评分；脑梗塞面积；脑缺血梗塞周边区神经元型 一氧化氮合酶(nNOS)阳性表达细胞率；脑组织病理组织学变化的影晌。 三．采用夹闭两侧颈总动脉再开放法制备小鼠全脑缺血再灌注损 伤模型，观察不同剂量给药组对小鼠脑SOD活力的影响。 四．采用毛细管法及小鼠断尾法观察不同剂量给药纽对小鼠凝血 时间和出血时间的影响。 五．采用倍比稀释法做溶血试验，观察不同剂量对兔RBC影响。 结果：一．利用大孔吸附树脂，在所选实验条件下，能有效分离TSL。 结果： 一．利用大孔吸附树脂，在所选实验条件下，能有效分离TSL。 制得TSL水溶液，含量为22．44mg／mL。标准曲线在 0．004mg／ml-0．02mg／ml范围内线性关系良好，平均加样回收率为 97．47％。 二．TSL对大鼠局灶性脑缺血的影响： 1．行为学评分： 1)与模型组(6．50-L-_L58)相比：TSLl lmg／Kg、44mg／Kg组及 肝素组的行为学评分均显著降低(5．25±O．89 P0．05；3．75±1．04 P O．01：1，50±O．72 P0．01)。 (2)TSL降低行为学评分有剂量相关性(P0，05) 2．脑梗塞面积： (1)与模型组相LL：TSLllmg／Kg及44mg／Kg组分别降低脑梗塞 亟积43，68％(P0．01)和80，59％(P0．01)：阳性对照组(肝素组) 能显著降低脑梗塞面积88．99％(P0．01)。 (2)两TSL组间比较，有显著差异(PO．01) 3．脑缺血梗塞周边区aNOS阳性表达细胞率： (1)与假手术组相比：模型组及给药组较假手术组nNOS阳性表 达细胞率均明显增高(P0．01)。 (2)与模型组相比：TSLl 1mg／Kg及44mg／Kg组分别降低nNOS 阳性表达细胞率11．57％(P0．01)和28．82％(P0．01)。 (3)两TSL组间比较：差异显著(PO．01)。 4。病理组织学变化： (1)与假手术组相比：模型组大体见额颞顶部颜色苍白，肿胀， 并向对侧移位，脑表面静脉充血。切片HE染色镜下见神经细胞胞浆和 胞核浓缩，深染，胞浆与核膜边界不清，核溶解或固缩，神经细胞外 周间隙变宽，神经细胞固缩为三角形；梗塞灶主要分布于MCA供血区。 (2)与模型组相比：各给药组脑缺血损伤情况均有不同程度减轻。 三．TSL对小鼠全脑缺血再灌后SOD活力的影响 1．与假手术组相比：模型组及TSL给药组均显著降低SOD活力 ·，。 (P0．01)：2．与模型组相比：给药组与模型组间无显著差异(PO．05)；尼莫 (P0．01)： 2．与模型组相比：给药组与模型组间无显著差异(PO．05)；尼莫 地平组可显著增加脑SOD活力(P0．01)。 四．TSL对小鼠凝血时间和出血时问的影响 1．凝血时间 (1)与NS组相比：TSL22mg／Kg及66mg／Kg组延长小鼠凝血时 间37．25％(PO．05)和68．75％(PO．01)；肝素组显著延长凝血时间 1878．12％(P(0．01)。 (2)两TSL组间比较有显著差异(P0．05)。 2．出血时间 (1)与NS组相比：TSL22mg／Kg及66mg／Kg组延长小鼠出血时 间42．19％(P0，05)和73．84％(PO，0t)：肝素组显著延长凝血时间 161．18％(P0．01)。 (2)两TSL组间比较差异显著(P0．05)。 五．TSL对兔RBC影响 TSL对兔RBC无凝血及溶血作用。 结论： 用大孔树脂法分离TSL简便快速，分光光度法测其含量应用方便， 准确。TSL水溶液静脉注射可降低大鼠局灶性血栓性脑缺血梗塞灶面 积；改善神经功能障碍：抑制大鼠局灶性脑缺血梗塞周边区nNOS表 达；可延长小鼠凝血时间和出血时问，无凝血及溶血作用。 关键词： 大孔树脂脑缺血山麦冬总皂甙 一氧化氮合成酶 Extraction