循环游离DNA无创性的肿瘤标志物在疾病诊断中的应用.docVIP

循环游离DNA-无创性的肿瘤标志物在疾病诊断中的应用 南华大学药物药理研究所 衡阳湖南421001 摘 要 循环游离DNA (cfDNA)是指凋亡或坏死的细胞进入血管中所释放的 DNA片段，主要存在于细胞外的环境中，呈游离状态。有学者研究发现特殊状态 时，其循环游离DNA的含量明显高于正常人。当机体在这些状态并R血中游离 DNA也具有肿瘤细胞DNA类似的特征，通过检测血液中游离DNA来反映某些疾 病的状态成为一种有力的手段。这篇综述着重是论述循环游离DNA是一个强有 力的诊断工具作为疾病诊断可靠的标志物。 关键词 循环游离DNA；诊断；分子标志物；肿瘤 1?前言 游离DNA是一种无细胞状态的胞外DNA主要是由单链或双链DNA组成, 以DNA?蛋白质复合物或游离DNA两种形式存在，主要存在于血浆或血清、脑脊 液、胃液、胆汁、淋巴液、尿液、滑膜液等体液中。 早在1948年Mendel和Metais等⑴首次报道在人的血中存在细胞外核 昔酸，他们发现循环游离DNA存在健康人和患者的血浆中都能检测到，早期由 于临床检查技术的局限性，相关临床应用才得到了长足的发展，1966年，Tan等 ⑵研究发现在系统性红斑狼疮患者的血清DNA含量比一般正常人要高，1973年 Kofflev等［3］也在其它一些比如肝炎、胰腺炎等病人血清中检测到比较高浓度的 DNA,之后在1977年，Leon等⑷硏究发现在胰腺癌患者中血液游离DNA水平过 高，第一次证实了肿瘤患者的游离DNA水平明显高于正常人，1989年，Stroun 等⑸根据游离DNA牛物化学的特性对肿瘤患者血液进行深入研究，得出游离 DNA很可能是来自于肿瘤细胞的结论。紧接着在1994年，Sorenson等⑹在胰腺 癌患者的外周血DNA中检测到了 K-ras基因的突变，由此可以证明，检测游离 DNA的分子改变或许就可以反映出原发肿瘤的相应状态，肿瘤分子标记物的研究 自此进入了一个崭新领域。大多数肿瘤因为缺乏有效的早期诊断手段，当被查出 时癌症大多发生转移并发展到了中晚期，错过了最佳治疗时机而使癌症病人的存 活率下降。游离DNA因为检测方便快捷，而U具非侵入性等特点，那么，随着 肿瘤分子生物学的深入研究，血液中游离DNA结合各类分子生物学检测技术， 有望成为具有一定敏感性及高特异性的肿瘤临床诊断方法。 2.循环游离DNA在疾病诊断中应用 2.1游离DNA在肿瘤突变中的检测?新一代肿瘤标志物 肿瘤组织是肿瘤DNA的主要来源，目前临床上主要通过侵入性检测， 以获取肿瘤组织样本进行检测。这项操作对患者有一定风险，有时也无法采集到 合适的样本，因此，人们一直努力在外周血中寻找新的肿瘤分子标志物，进而实 现通过非侵入性的方式对肿瘤进行检测，肿瘤是体细胞突变疾病，这些突变仅存 在肿瘤细胞中。肿瘤细胞死亡后将释放自身的DNA片段到血循环中，即循环肿 瘤DNA (ctDNA)o多项研究显示，血液中的循环肿瘤DNA可以作为一类特异性 的分子标志物用于肿瘤的检测和预后监测。检测游离DNA中肿瘤特异性的基因 突变具有较好的临床价值，如EGFR、KRAS和TP53基因等这些在多种类型肿瘤 中具有高突变频率的基因其检测对肿瘤的早期诊断具有重要的临床意义。如Sun H[刀等通过扩增PCR方法检测肺癌EGFR基因突变，其中非小细胞肺癌EGFR基因 19外显子占总突变率的44%,是最常见的突变类型，以及21外显子上的L858R 突变最为常见，占其总突变的41%,此外TP53基因在肺癌突变率中也高达45%, 可用于判断肺癌基因分型发生的风险评估。在对30例携带PIK3CA、TP53基因 突变乳腺癌患者的循环肿瘤DNA水平进行分析后发现，循环肿瘤DNA水平的变 化与该患者的治疗及预后情况基本一致，也是说检测出肿瘤组织中游离DNA含 量与其PIK3CA基因突变存在一致的改变。在结直肠癌发生转移的患者中也对 cfDNA水平进行了分析，通过ctDNA可以检测到具有临床意义的KRAS基因突变， 检岀率为87.2%,特异性达到了 99.2%[8],循环游离DNA的浓度也相应升高， 且发现浓度升高与基因突变检出率呈正相关。在非霍奇金淋巴瘤患者血浆中，检 测到免疫球蛋白重链序列的重排，类似微卫星不稳定，在实体肿瘤中经常发现的 这个特征，首次在小细胞肺癌患者血浆和头颈癌患者血清中检测发现，灵敏度检 测微卫星改变也是有限的。在KANYAMA等对胃癌患者的研究中，血清P16过甲 基化水平明显高于对照组，与相应的实体肿瘤检测结果一致但是并没有检测到 与肿瘤组织类型，疾病分期及是否转移是否相关。在启动子区CpG岛甲基化在 抑癌基因的甲基化改变，经常在多种肿瘤中被发现，甲基化基因突变有P16、 DAPK、GSTPI基因等，采用甲基化特异性PCR (MSP)被证