生命延续的本质-遗传与变异.pptVIP

身体上出现了创伤，血管破裂，血液能很快凝结成块，封闭伤口，防止血液外流，也阻挡细菌等的入侵。血友病就是由于血液缺乏凝结能力，出血不止而可能导致死亡的一种遗传病。一些无脊椎动物血液不能凝结，但它们的肌肉有很强的收缩能力，能将伤口迅速封闭，防止血液外流。 血凝是一个十分复杂的过程。在正常情况下，只有血管破裂、创伤出现时，血液与创伤面上的某些因子相遇，才能凝结。现在已知，除血小板外，至少有15种因子（蛋白质）参与了这一过程。这是一个级联反应，即一个反应的产物引发另一个反应，并且在一系列的连续反应中，第一次反应都比前一次规模大，成果多。在血凝这个级联反应中，出现创伤后，血小板与创伤面接触而发生的原初反应，即使是很小的，经过级联反应，就可导致大量纤维蛋白原转变为不溶解的纤维蛋白，而使血液凝结。　　血管的内壁上缺少促使血液凝结的因子，并且血液中还含有一些抗凝因子，如肝素、抗凝血酶等，所以血液在血管中不会凝结。　　但有时血液在血管中竟凝起来而成血栓，这是不正常的病理状态。如果血栓发生在脑血管和心、肺血管中，就将发生严重的后果，甚至导致死亡。 * /blog-290052-607306.html 无疑，高通量测序技术给分子诊断行业带来巨变，因为测序效率高，价格便宜。可是从2006年Next-gen测序技术出台到现在已经六年了，美国FDA 还没有批准一个检验产品进入临床使用，为什么？难在哪里？去年六月份，美国FDA召开了一个有关高通量测序临床应用的公开听证会。这里有比较详细的会议记录： 听证会的重点实际上是FDA的专家向社会上的专家请教，共同制定一个报批途径的会议。大家充分分析了这个技术平台可能出现的不定因素：标本的处理（核酸提取），扩增， 和信号检测，测序平台特异的出错和纠错问题，生物信息学方面可能出现的问题，临床验证程序和标准化问题等等。从测序平台的角度看，专家讨论了测序准确性如何衡量？测序完整性（读DNA分子的长度）如何评估？测序深度(同一分子测序多少次）？和质量评分等等。凡是关心高通量测序技术临床应用的人都应该认真学习一下这个文献。在美国，这类体外分子诊断系统的报批一般有三个组成部分：（1）仪器报批；（2）软件报批；（3）试剂报批。有些仪器生产厂家（比如Luminex）自己并没有可以上临床的试剂产品。比如， 最先把Luminex仪器做到临床上的是美国一家叫Athena的公司，而他们报批的产品是自身免疫抗体的检测。仪器生产公司（如果自己不生产相关试剂的化）需要向FDA申报仪器备案（包括仪器的性能，安全性，准确性，可重复性，稳定性，校对方法等），然后友试剂生产公司申报试剂的临床研究结果（准确性，敏感性，可重复性，稳定性等）。试剂申报公司（或者仪器生产公司）还需要申报软件，包括用户界面，计算和逻辑的准确性，抗干扰和纠错能力等。那么，回过头来看为什么美国FDA还没有批准临床使用的高通量测序产品。（1）仪器报批还没有完成。比如Illumina的HiSeq，MiSeq，454等等常用的下一代测序平台的仪器硬件和相关序列分析软件还没有得到FDA的认可。（2）试剂盒的临床验证还没有完成。用高通量测序技术检测什么病都需要单独特殊处理。不同的标本来源，核酸提取方法和技术平台，扩增方法，测序平台等等都需要用临床标本来验证。美国FDA一般规定每个体外诊断项目的临床试验至少是前瞻性地（不能从冰箱里拿陈年标本做）检测100例阳性标本。比如，如果那个公司想做唐氏综合症的产前诊断，那他们就需要在正在怀孕的孕妇群体中检测到100个唐氏胎儿。这听起来不算多，可是唐氏综合症的发病率是1／1000(平均值，孕妇年龄越大，发病率越高），检测到100个阳性标本就至少要做10万例临床！如果你的检测指标是多重的（不单单查21三体，还检测18三体，13三体等染色体异常），那每个指标都需要100例阳性结果。这就使得临床验证时间长，费用高。分子靶点越多，临床验证也越复杂。因为厂家在证明阳性结果的同时，还需要证明阴性结果也是真的。还有，进行临床验证用的试剂需要预先生产三批，批量不能小于一定数量（几千到几万人份），这样FDA才能知道厂家生产的试剂的可重复性如何，稳定性如何，储藏期多久，运输有没有问题等产品质量相关的问题。对任何一家公司来说，做怎么复杂的临床验证都是很大的一笔开销，所以他们在决定投资的时候就需要确认该项目有专利保护，这样他们报批下来产品以后才能把投资赚回来。对厂家来说，报批是花钱费时的麻烦事。可是不经过这个过程，消费者的切身利益谁来保证？诊断错误谁负责任？在美国，我多次提到的CLIA 参比实验室是新技术进入临床的一个“捷径”。不是去报批产品，而是把实验室的管理体系和管理人员“报批”了，这样该实验室的检验项目也就自动获得临床准入的