皮质骨来源成骨细胞复合异种脱蛋白骨应用于脊柱融合的实验研究.pdfVIP

第1章引言 织必须与邻近的宿主骨结合。此外，还必须考虑支架材料的表面粗糙情况、生物 力学情况和整体孔隙率。骨组织工程材料不仅影响种子细胞的生物学特性和培养 效率，而且决定移植后能否与受体很好地适应并结合在一起，从而发挥其修复骨 缺损的作用。因而在目前骨组织工程的研究中，寻找理想的支架材料是一大热点。 解放军第一七五医院全军骨科中心自1991年起选用牛长骨干骺端松质骨，采用双 bone，DPB)， 氧水、乙醚脱蛋白和脱脂后，制作成异种脱蛋白松质骨(Deproteinized 经动物试验和3000佘例的临床应用表明该材料具备与人体骨组织相似的三维结 构，更符合骨修复的生理要求，而且生物相容性及传导成骨作用良好，具有来源 丰富、制作要求低、难度小、费用低等人工合成材料难以相比的优点。该材料可 作为骨组织工程中较为理想的支架材料。 本课题前期试验已证实皮质骨来源的成骨细胞成分更纯，表型更稳定，且可 采取连续植块培养法获取大量成骨细胞；同时体外生物相容性试验证实自制异种 脱蛋白骨具有良好的生物相容性。本实验在前期试验的基础上，以皮质骨来源成 骨细胞为种子细胞，以脱蛋白骨为支架材料，体外构建组织工程骨，行兔脊柱横 突间融合实验。通过影像学、组织学和手工力学等方法评价脊柱融合情况，以期 为脊柱融合术中骨移植替代物的选择提供理论依据。 2 第2章材料和方法 第2章材料和方法 2．1实验动物 性新西兰大白兔(6周龄，体重O．5kg)1只，购自上海市动物实验中心，动物合 格证明书：医动字第04—54—4号。 2．2主要试剂 DMEM／F．12培养基 Gibco 胎牛血清 Hyclone，PAA 胰蛋白酶 AMRESCO 双抗(青霉素和链霉素) Hyclone 结晶紫 Sigma 二甲基亚砜(DMSO) Sigma 噻畔蓝(MTT) AMRESCO 氯化钠(分析纯) 广东汕头新宁化工厂 氯化钾(分析纯) 广东汕头新宁化工厂 磷酸二氢钾(分析纯) 广东汕头新宁化工厂 磷酸氢二钠(分析纯) 广东汕头新宁化工厂 对硝基苯磷酸二钠(PNPP) Sigma ACROS 2．氨基．2．甲基．1．丙醇(AMP) 酶免骨钙素 美国ADL TritonX．100 AMRESCO 超纯水 厦门大学物理微机电中心 酒精 解放军第一七五医院制剂科 碘伏 解放军第一七五医院制剂科 戊巴比妥钠 上海生物工程有限公司 青霉素钠 上海先锋药业有限公司 第2章材料和方法 2．3主要仪器 烤箱 上海市跃进农场医疗器械厂 光学显微镜 日本 切片机 LEICARM2145(德国) X线摄影机 日本岛津 CT机 SIEMENZ(64排) 牙科磨钻 解放军第一七五医院口腔科 C02培养箱 E191TC(美国西盟公司SIM) 电热恒温水槽DK