硫酸乙酰肝素对乳鼠颅骨成骨细胞增殖及分化成熟的影响.pdfVIP

中国骨质疏松杂志　 ２０１８年４ 月第２４卷第４期　 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓ，Ａｐｒｉｌ２０１８，Ｖｏｌ２４，Ｎｏ． ４ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎｌｉｎｅｗｗｗ．ｗａｎｆａｎｇｄａｔｅ．ｃｏｍ．ｃｎ　 ｄｏｉ：１０３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃７１０８ ２０１８ ０４００１ ４２１ ·论著 · 硫酸乙酰肝素对乳鼠颅骨成骨细胞增殖及分化成熟的 影响 １，２＃ ２＃ ２ １ １∗ 刘仪 　 徐朱杰 　 王瑞 　 邱立朋 　 陈敬华 １． 江南大学药学院药用生物高分子研究室，江苏 无锡２１４１２２ ２． 南京医科大学附属无锡市人民医院骨科，江苏 无锡２１４０００ 中图分类号： Ｒ６８　 　 文献标识码： Ａ　 　 文章编号： １００６⁃７１０８（２０１８）０４⁃０４２１⁃０８ 摘要： 目的　 探讨硫酸乙酰肝素（ｈｅｐａｒｉｎ ｓｕｌｆａｔｅ，ＨＳ）对乳鼠颅骨成骨细胞增殖及分化成熟的影响。 方法　 酶消化法分离乳 ４ 鼠颅骨的成骨细胞，培养并进行鉴定。 取生长情况良好的成骨细胞制成浓度为２０×１０ 个／ ｍＬ 的细胞悬液，依据在成骨细胞 培养基中添加不同浓度的ＨＳ，将实验分为Ａ组（０ μｇ／ ｍＬ）、Ｂ组（１ μｇ／ ｍＬ）、Ｃ组（５ μｇ／ ｍＬ）、Ｄ组（１０ μｇ／ ｍＬ）、Ｅ组（２５ μｇ／ ｍＬ）、Ｆ组（５０ μｇ／ ｍＬ）、Ｇ组（１００ μｇ／ ｍＬ）。 以Ａ为对照组，其余组为实验组。 采用噻唑蓝（ＭＴＴ）法检测４８ ｈ及９６ ｈ不同ＨＳ 浓度下细胞的增殖情况，通过碱性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＫＰ）检测试剂盒测定细胞２４ ｈ和４８ ｈ 的ＡＫＰ活性，Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ法定量２４ ｈ和４８ ｈ成骨标志蛋白Ｉ型胶原蛋白（Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｉ）和Ｒｕｎｘ－２蛋白的表达，茜素红染色法计数１４ ｄ成骨细胞基 质矿化结节量。 结果　 ＭＴＴ检测示，硫酸乙酰肝素在４８ ｈ、９６ ｈ均抑制成骨细胞的增殖，相比于对照组差异有统计学意义（Ｐ ＜００５）。 ＡＫＰ活性检测示，２４ ｈ和４８ ｈ 的Ｅ组和Ｆ组的ＡＫＰ活性相比于Ａ组明显增高（Ｐ ＜００５），且Ｆ组的ＡＫＰ活性最 高。 Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｉ和Ｒｕｎｘ⁃２蛋白表达检测显示，５０ μｇ／ ｍＬ ＨＳ作用２４ ｈ和４８ ｈ后与对照组相比，Ｒｕｎｘ－２和Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｉ蛋白的表 达均升高；１００ μｇ／ ｍＬ ＨＳ作用２４ ｈ和４８ ｈ后与对照组相比，Ｒｕｎｘ－２ 和Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｉ蛋白的表达均降低。 矿化结节染色示，Ｂ、 Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ组均能促进矿化结节的生成，Ｆ组对成骨细胞基质矿化作用最强，Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ和Ｆ组相比于Ａ组差异均有统计学意义 （Ｐ＜００５）。 而Ｇ组的矿化结节数量低于Ａ组。 结论　 ＨＳ的成骨作用显著，且５０ μｇ／ ｍＬ ＨＳ促进成骨细胞成熟分化的能力 显著优于其他浓度。 关键词： 硫酸乙酰肝素；成骨细胞；细胞培养；矿化；骨修复 Ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｐａｒｉｎ ｓｕｌｆａｔｅ ｉｎ ｆｅｔａｌ ｒａｔ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ ｃｅｌｌｓ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ， ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｉｎｅｒａｌｉｚａｔｉｏｎ １，２＃ １，２＃ ２ ２ １∗ ＬＩＵ Ｙｉ ，ＸＵ Ｚｈｕｊｉｅ ，ＷＡＮＧ Ｒｕｉ ，ＱＩＵ Ｌｉｐｅｎｇ ，ＣＨＥＮ Ｊｉｎｇｈｕａ １． Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｊｉａｎｇｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｘｉ２１４１２２ ２． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃｓ，Ｗｕｘｉ Ｐｅｏｐｌｅ’ｓＨｏｓｐｉｔａｌ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ ｔｏ Ｎａｎｊｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｘｉ２１４０００，Ｃｈｉｎａ ＃：Ｃｏ⁃ｆｉｒｓｔ ａｕｔｈｏｒ ∗Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＣＨＥＮ Ｊｉｎｇｈｕａ，Ｅｍａｉｌ