正交设计优选脑血康丸中总氨基酸的测定工艺.docVIP

正交设计优选脑血康丸中总氨基酸的测定工艺 1?武警总医院药剂科北乐100039； 北京中医药大学 北京100102； 江西省药品检验检测研究院（江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中 心）江西南昌330029 【摘要】目的：优选出脑血康丸中总氨基酸的最佳测定工艺。方法：采用 L9（34）正交试验设计，以水解温度、水解时间和盐酸浓度为考察因素，脑血康 丸中总氨基酸的含量和得率为考察指标，确定脑血康丸中总氨基酸的最佳提取条 件。结果：最佳测定工艺为水解温度100°C,水解时间为22 h,盐酸浓度为6 mol?L -lo结论：该优化测定工艺可用于脑血康丸中总氨基酸的测定，为脑血康丸的进 一步研究提供了参考。 【关键词】正交设计；脑血康丸；总氨基酸；含量测定 【中图分类号1R927.2 【文献标识码］B 【文章编号J1674-8999（2015 ） 6-0142-02 脑血康丸水蛭经加工制成的丸，能活血化瘀，破血散结。木品收载于《国家 食品药品监督管理局国家药品标准》YB2009Z,只有一个薄层鉴别， 难以控制质量。木文建立了脑血康丸的含量测定方法，采用正交设计法对脑血康 丸中总氨基酸的测定方法?4］进行改进，提高有效成分的提出率，可用于质量 控制。 1仪器与试药 德国syknm 公司S7130 Amino acid reagent organizer全自动氨基酸分析仪。 Sartorius BT25S型十万分之一电子天平,混合氨基酸对照品（sigma公司,H型， 批号,脑血康丸（四川康特能药业有限公司,批号为20130511）。水为超纯水，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱：磺基强酸性阳离子交换树脂LCAK 06/Na,（150rnrntimes;4.6mm,5mu;m）,缓冲液 A （称取柠檬酸三钠 11.8g^ 柠檬 酸6.0g和苯酚0.5g,加适量水溶解，再加甲醇65mk 37%盐酸5.6ml和辛酸0.1ml 用水稀释至1L,加氢氧化钠调节pH至3.45并通过0.45?m滤膜过滤）、缓冲液B （取二水柠檬酸三钠19.6g、氢氧化钠3.更、硼酸5.0g加适量水溶解，再加辛酸 0.1ml用水稀释至1L,加37%盐酸调节pH至10.85并通过0.45?m滤膜过滤）、 再生液（称取氢氧化钠20?0g、EDTA0.2g,用水稀释至1L并通过0.45?m滤膜过 滤）、样品稀释液（称取柠檬酸三钠11.8g^柠檬酸6.0g和苯酚2.0g,加适量水 溶解，再加37%盐酸10.4ml和辛酸0.1ml用水稀释至1L,加氢氧化钠调节pH至 2.20并通过0?45?m滤膜过滤）、苗三酮试剂（称取苗三酮20g和苯酚2.0g,用 400ml钠钾缓冲液和600ml甲醇溶解）。检测波长为440nm （脯氨酸）和570nm （其他氨基酸）；进样量：50?L流速：A泵（缓冲液）0.45ml/nim, M泵（苗三 酮试剂泵）0.25ml/nim,梯度洗脫结果见表1,程序升温见表2。在上述色谱条 件下，分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液依法测定，结果见图1? 图6o 2.2对照品及供试品溶液的制备 2.2.1对照品溶液 精密量取混合氨基酸对照品lml,置25 ml量瓶中，加样品稀释液至刻度, 摇匀，即得。 2.2.2供试品溶液 取装量差异项下的本品，研细，取约0.25g,精密称定，置厌氧水解管中， 加入6mol?L-l盐酸溶液（含0.1%苯酚）10 ml,将样品全部浸没，置冰块（冰水） 中冷冻10m.no充高纯氮气1?2 min,注意保持水解管竖直，不要将液面溅起， 移开氮气后立即盖好软塞，旋紧密封盖。将水解管置于(100plusmn; 1) °C恒温 烘箱中水解22 h。水解完成后，冷却，混匀，精密吸取水解液0.2 ml,于60°C以 下浓缩至干。加入3 ml样品稀释液，震荡混匀，用0.22mu;m滤膜滤过，取续 滤液，即得。 2.3脑血康丸中总氨基酸含量测定方法的建立 2.3.1标准曲线的制备 精密吸取混合氨基酸对照品溶液80, 125, 125, 60, 80mu;l分别置10, 10, 5, 1, lml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。 分别精密吸取上述对照品溶液50mu;l,注入氨基酸测定仪进行测定。以峰面积 为纵坐标，以进样浓度为横坐标，绘制标准曲线。 2.3.2精密度试验 精密吸取混合对照品溶液50mu;l注入氨基酸分析仪中进行测定重复测定 6次，测得天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、绻氨酸、 甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸和 脯氨酸峰面积的 RSD 分