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2．2实验方法…………………………………………………………………………………28
2．2．1植物基因组的提取……………………………………………………………………．．28
2．2．2载体构建………………………………………………………………………………。28
2．2．2．1
PCR扩增………………………………………………………………………………………………………．28
2．2．2．2凝胶电泳中DNA片段的回收………………………………………………………29
2．2．2．3连接反应……………………………………………………………………………．．29
2．2．2．5
2．2．3大肠杆菌感受态细胞的制备和转化…………………………………………………．30
2．2．3．1大肠杆菌感受态细胞的制备………………………………………………………．．30
2．2．3．2大肠杆菌细胞的转化………………………………………………………………。30
2．2．4大肠杆菌中质粒的提取………………………………………………………………．31
2．2．5农杆菌感受态细胞的制备和转化……………………………………………………．31
2．2．5．1根癌农杆菌GV3101感受态细胞的制备……………………………………………31
2．2．5．2冻融法转化农杆菌细胞……………………………………………………………。32
2。2．6拟南芥的转化及转基因拟南芥的鉴定………………………………………………．32
2．2．6．1拟南芥的转化………………………………………………………………………。32
2．2．6．2转基因拟南芥的鉴定………………………………………………………………。32
2．2．7
RNA的提取纯化与反转录……………………………………………………………33
2．2．7．1
2．2．7．2
RNA的纯化………………………………………………………………………………………．33
2．2．7．3
RNA中基因组DNA的去除………………………………………………………．．34
2．2．7．4
RNA的反转录………………………………………………………………………．34
2．2．8实时定量PCR…………………………………………………………………………．34
2．2．9
GUS活性测定…………………………………………………………………………35
2．2．1
O转基因植物GUS组织化学染色分析………………………………………………．36
2．2．1
1叶绿素含量的测定……………………………………………………………………36
2．2．12透射电镜样品制备与观察……………………………………………………………37
2．2．13植株总糖提取与测定…………………………………………………………………38
3结果与分析…………………………………………………………………………………39
3．1AtAspRS的表达模式分析………………………………………………………………．39
3．2超表达AtAspRS植株的获得……………………………………………………………40
3．3
AtAspRS在拟南芥中的功能鉴定………………………………………………………．．4l
3．3．1超表达AtAspRS植株的表型分析……………………………………………………．41
3．3．2超表达AtAspRS植株中叶绿素含量测定……………………………………………．．43
3．3．3透射电子显微镜观察超表达AtAspRS植株中叶片细胞形态………………………．44
3．3．4超表达AtAspRS植株总糖测定………………………………………………………．46
3．3．5超表达AtAspRS植株的表达谱分析…………………………………………………．46
3．4
AtAspRS在种子萌发中的功能鉴定……………………………………………………．50
4讨论………………………………………………………………………………………………………………………5zI
5结论………………………………………………………………………………………………………………………56
参考文献……………………………………………………………………………………一57
致谢…………………………………………………………………………………………………………………………67
山东农业大学硕士学位论文
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