辣椒离体再生体系的建立及抗病转录因子Pti4基因遗传转化-蔬菜学专业论文.docxVIP

论文独创性声明 喇喇嘛wmmw ，Y18ur u ， 本人郑重声明 t 所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取 得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标性和致谢的地方外，学位论文中不包 含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学 或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一间工作的同志对本研究所 做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 研究生签名 t 7什 y/o 年 j 月川日 关于论文使用授权的声明 本人完全了解四川农业大学布关保留、使用学位论文的规定，即 z 学校有权保留并向 国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、 缩印成扫描等复制手段保存、汇编学位论文。阿意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体 上发表、传播学位论文的全部或部分内容. fhA命!乡均6bdq/才 介叮U fh A命! 乡均6 b dq/才 介叮U lld咄}olo 年 i月 )1 ll d咄 摘要 辣椒 (Capsicumu ruuuun L.)是一种宽耍的蔬菜作物，并因其具有特殊风味而广 受青睐，目前在世界上许多国家和地区被广泛栽培。但由于各种病害的危害，辣椒的 产景和品质受到严寰的影响。因此提高其抗病性一直是十分重要的研究课题。常规育 种方法常常受到种质资源匮乏和育种周期长的限制，而植物基因工程技术可在一定程 度上辅助克服这些问题。在系统获得抗性中，许多 PR (病程相关〉基因协同表达， 可以有效地提高植物的广谱抗病性。因此导入控制抗病基因表达的转录因子基因，从 而使 PR 基因协同表达成为应用基因工程技术提高植物抗病性的一种更加有效的方 法。番茄抗病转录因子 Pti4 基因蛋白质产物超表达时，启动子区域含有 OCC-box 或 类似 OCC巾ox 序列的 PR 基因会显著表达。即通过转入外源 Pti4 基因激活大量的 PR 基因的表达，使转基因植物的综合抗病能力提高。 本试验旨在通过建立的辣椒离体再生体系，利用农杆菌介导法将番茄抗病转录因 子 Pti4 基因导入到辣椒中，并对转基因植株进行 PCR 检测.主要研究结果如下 z 1.辣椒离体再生体系的建立 1)通过 4 工金条和 )农炮椒 1 号不定芽诱导能力的比较，发现基因型对 不定芽的诱导有较大的影响; 2)不定芽分化率以及每外植体平均分化芽数随着苗龄的增加先升高后降低， 12- 16d 是辣椒外植体离体再生的最佳苗龄: 3) Flamingobil1外植体优于带柄子叶，带柄子叶优于子叶; 4) =金条的最优分化培养基是 MS+O.2mgILIAA+5.伽19/L6-BA+1O.OmgIL AgN03+6.5gIL琼脂 +30.0gIL煎糖; )农炮椒 1 号的最优分化培养基是 MS+O.5mgILIAA+5.0mgIL6-BA+6.0mg/LAgN03+6.5g/L琼脂+30.0g/L煎糖: 5) 2.Om以， GA3 为不定芽伸长的最适浓度: 6) 最优生根培养基配方是 MS+O.2mg/L队A+O.lmgILNAA +6.5gIL琼脂+30.0g/L 煎糖。 2. 辣椒的遗传转化 通过农杆菌介导法将外源目的基因 Pt间转入辣椒中，共获得 52 株辣椒 Km 抗性植株。用 NPT 11引物对这 52 株抗性植株进行 PCR 检测(空白作为阴性对 照，携带目的基因 Pti4 的农杆菌菌液作为阳性对照)，其中 45 株抗性植株扩增 出预期基因片段，转化率约为 86.5%。 关键词:辣椒离体再生体系抗病转录因子 Pti4 基因遗传转化 日 Abstract Pepper (Capsicum annuum L.) is one of the most important vegetables，and accepts favour broadly because of its special flavour. It is cultivated broadly in manyωuntries and regions in the world 创 present.But its output and quality have been severely fluenced due to plant diseases. So improvement of its disease-resistance has always been an important research field. Conventional breeding me由ods are often lin脱d by germplωm reso山ce