实验四 真核生物基因组DNA的提取和分析4.ppt

练习：加样器读数为 100，实际体积各为多少? 移液器的调节 (1)首先观察目前读数,假设为050: 1000 ?l: 500 ?l 100 ?l: 50 ?l 20 ?l： 5 ?l (2)顺时针调节--- 读数变小 逆时针调节--- 读数变大 (3)注意：调节前加样器读数正处于最大量程或最小量程时，如果向错误方向调节，马上会超出量程，将会损害加样器的精度。 移液器使用步骤 6）(吸头内有液体时，不能将加样器倒置或平放，以防液体倒流损坏加样器！) 贴容器内壁，将液体匀速打出，加样器推到第二挡。观察吸头内液体是否完全打出并立即弃于废物盒内. 5）抬起加样器,估计体积是否正确,将外壁液体用容器口引流回去 4）缓慢松开拇指,吸取液体。松开过快，液体上冲会腐蚀加样器;完全放开拇指后，停留约半秒钟, 急于离开液面，容易吸入空气。 3）将吸头插入液面下适当深度，过深可能会腐蚀加样器, 过浅可能会吸入空气。 2）吸取液体前，先打到第一挡。 1）选择加样器,观察读数,调节读数，吸头的安装要紧密。不要用手直接拿吸头，安上吸头后一定要再固定一下 * * * * 置50°C水浴50分钟讲解： 能溶解入10％一l5％的水分，因溶解的水分而损失部分DNA (酚不能抑制RNAase的活性, 溶解掉部分ploy(A)RNA) * * * * * * * * * * 实验室规则 （一）保持实验室安静，认真仔细地按实验指导进行实验。 （二）穿戴好实验服。保持实验台的清洁整齐。 （三）爱护仪器，谨慎使用。节约使用药品试剂，蒸馏水，自来水和电。 （四）不得将高温、强酸强碱、有毒污垢物品抛洒在实验台上。 （五）公用物品用毕放回原处，不得私自占有。 （六）取完试剂应将瓶盖盖好，切勿错盖，用毕放回原处。 （七）加热、用电，使用剧毒腐蚀试剂应注意安全操作，避免事故。 （八）废弃液体除指定有专门容器收集者外，应倒入水池，并放水冲走，固体废物倒入废物缸内。动物尸体应放入指定的容器中。 （九）实验过程中自己不能解决或决定的问题，切勿盲目处理，应及时向指导教师反映取得帮助。 （十）实验完毕，须将试剂排列整齐，整理好公用物品，将仪器洗净收起。檫净实验台，请指导教师检查，允许后方可离开。 实验报告 实验结束后，应及时整理和总结实验结果及记录，按照下列顺序写出实验报告： 实验报告首页：实验名称（The title of experiment ）；姓名；学号；班级；组别；同组同学；带教教师；实验日期等。 正文：①原理（Principle）；②操作步骤（Operational procedure）；③实验结果（Results）：包括照片、原始数据、计算过程及图表等；④讨论（Discussion）：对实验方法，实验结果和异常现象进行探讨和评论，以及对于实验设计的认识、体会和建议。 成绩评分标准 50% 实验 + 50%理论考试 实验课8次，实验报告， 实验表现（包括迟到早退，着装规范，实验操作规范，实验室卫生值日等）， 8次实验总分最后按比例计入总成绩。 实验报告存档，不归还。 理论考试内容来自于讲义及平时教学。 第八次设计性实验课安排 分组方案：4人一组（无法组队同学加入其它组） 答辩ppt内容： 实验目的，意义，原理，实验方法选择，预计结果及数据表现形式，实验难点及可能出现问题，可能出现的实验结果偏差及解释 答辩安排： 最后一周答辩，每组时间控制为20分钟演讲，10分钟提问。 设计性实验题 1 免疫球蛋白IgG的分离纯化与鉴定。 2 人血清白蛋白的提取纯化及分子量的测定。 3 蛋清中溶菌酶的分离鉴定。 4 小鼠肝脏过氧化氢酶的分离纯化及酶动力学研究。 5 如何从动物心肌细胞中提取乳酸脱氢酶同工酶？ 6 如何提取真核细胞中的线粒体基因组DNA？ 7 请设计实验从基因及蛋白表达角度讨论老年痴呆症模型小鼠与人类老年痴呆症的可比较性 （即小鼠模型建立的可靠性）8 请设计实验从基因及蛋白表达角度追踪老年痴呆模型小鼠发病期典型变化，及给药治疗后效果评价9 蛋白质的表达具有一定的组织特异性，请以实验小鼠胰腺和肝脏为材料设计实验检测羧肽酶A1酶原(procarboxypeptidase A1)和白蛋白(Albumin)并计算这两种蛋白质在胰腺和肝脏中的表达量。 10 细胞色素氧化酶（Cytochrome oxidase）在肝脏中有三种亚型，即细胞色素氧化酶1，2和3，请以实验小鼠肝脏为材料设计实验检测这三种酶的表达并计算它们的表达量。 实