第十二部分色谱分析法.pptVIP

第十二章 色谱分析法;第12章 色谱分析法;12.1 概述一、色谱法简介;Tswett植物色素分离实验图示： 样 品：植物色素 固定相：CaCO3颗粒 流动相：石油醚 ;;表1 色谱法的发展简史;表2 色谱法起过关键作用的诺贝尔奖研究工作;1906，俄国植物学家 M.Tswett 发明色谱法，色谱之父 1931，对液固吸附色谱的杰出贡献者库恩，分离出60多种胡萝卜素，核黄素、维生素，获1938年诺贝尔化学奖 蒂塞利乌斯(Tiselius)因电泳分析和分析方法的研究，发现血清蛋白组分，获1948年诺贝尔化学奖 1941，马丁(Martin)和辛格(Synge)创始分配色谱特别是纸色谱而共获1952年诺贝尔化学奖 氨基酸自动分析仪发明人S.穆尔(Stanford Moore)和W.H.斯坦(William Howard Stein)，定量分析方法解决了有关氨基酸、多肽、蛋白质等复杂的生物化学问题，获1972年诺贝尔化学奖;1. 色谱法的定义 色谱法又称色层法或层析法，是一种物理化学分析方法，它利用不同溶质(样品)与固定相和流动相之间的作用力(分配、吸附、离子交换等)的差别，当两相做相对移动时，各溶质在两相间进行多次“平衡”，使各溶质达到相互分离。 固定相：在色谱分离中固定不动，对样品产生保留的一相。 流动相：带动样品向前移动的另一相，与固定相处于平衡状态。;利用不同物质在固定相和流动相中具有不同的分配系数，当两相作相对移动时，使这些物质在两相间进行反复多次分配，原来微小的分配差异产生了很明显的分离效果，按照先后顺序依次流出色谱柱。;根据流动相的状态将色谱法分成四大类。;1.按两相分子的聚集状态分类;色谱过程是物质分子在相对运动的两相间分配平衡的过程。在混合物中，若两个组分的分配系数不等，则被流动相携带移动的速率不等，即形成差速迁移而被分离。如图所示。;1. 色谱过程;2. 基本术语;名词术语：色谱峰、基线、峰高h、标准偏差σ、峰底宽W、半峰宽W1/2、峰面积A；;2. 基本术语;（1）根据色谱峰的数目，可以判断试样中所含组分的最少个数； （2）根据色谱峰的保留值可以进行定性分析； （3）根据色谱峰高或面积可以进行定量分析； （4）根据色谱峰间距及其宽度，可对色谱柱的分离效能进行评价。;色谱分离的基本要求是实现混合物中各组分的分离。 色谱分离的首要条件是相邻两组分的保留值存在一定的差别，两组分的色谱峰间距要足够远。另一个条件是色谱峰区域宽度要窄。这就涉及到色谱热力学和动力学。 在解决多元混合物分离问题时，不仅要求各组分间达到一定的分离度，还要求分离速度快，分离的组分多。;1. 分配系数(K)：色谱过程中，在流动相和固定相中的溶质分子处于动态平衡。平衡时组分在固定相(s)与流动相(m)中的浓度之比，称为分配系数。;又称为分配比。是平衡状态下，组分在固定相(s)与流动相(m)中的质量之比。色谱柱的容量因子是溶质分子与色谱柱填料相互作用强度的直接量度，是衡量色谱柱对被分离组分保留能力的重要参数。 　;分配系数不同的各组分具有不同的保留值，因而在色谱图上有不同位置的色谱峰。 　;1. 塔板理论的基本假设：;塔板理论的这些假设，实际上是把组分在两相间的连续转移过程，分解为间歇地在单个塔板中的分配平衡过程，经过多次分配平衡后，分配系数小的组分先达到塔顶（即挥发性大的组分先流出色谱柱）。色谱柱的塔板数可高达几千甚至几万，使被测组分在分配系数间有微小的差别时就可以得到分离。;2. 塔板理论的计算公式;3. 塔板理论的优点和局限;为了克服塔板理论的缺陷，Van Deemter等在Martin等人的工作基础上，较完整地解释了速率理论。后来，Giddings等又作了进一步的完善。速率理论充分考虑了溶质在两相间的扩散和传质过程，更接近溶质在两相间的实际分配过程。 当溶质谱带向柱出口迁移时，必然会发生谱带展宽。谱带的迁移速率的大小决定于流动相线速度和溶质在固定相中的保留值。同一溶质的不同分子在经过固定相时，它们的迁移速率是不同的，正是这种差异造成了谱带的展宽。谱带展宽的直接后果是影响分离效率、降低检测灵敏度。所以，抑制谱带展宽就成了高效分离追求的目标。 引起谱带展宽的主要因素有：(1)涡流扩散；(2)分子扩散；(3)传质阻力。这些因素都统一于Van Deemter方程中。;Van Deemter方程;Van Deemter方程方程中各项的意义;引起谱带展宽的主要因素;引起涡流扩散的原因是色谱柱内的多路径。溶质分子在前进过程中形成的这种紊乱类似于涡流的流动，所以称之为涡流扩散。 A=2?dp 空心毛细管柱无多径相：A＝0?;引起分子扩散的原因是浓度梯度。分子扩散是溶质分子在移动方向上向前和向后的扩散，引起谱带展宽。它是由浓度梯度