第十三部分细胞凋亡与衰老.pptVIP

三章细胞程序性死亡与细胞衰老 ●程序性细胞死亡(Apoptosis)  ●细胞衰老(cellularaging或cellsenescence)   一、程序性细胞死亡 PRIZED Horvitz, and Sulston share Physiology or Medicine Nobel （2002） “for their discoveries concerning genetic regulation of organ development and programmed cell death” 1090 –131= 959(cells) 秀丽广杆线虫(Caenorhabditis elegans )                                                                                                                           概念： 细胞凋亡是一个主动的由基因决定的自动结束生命的过程，也常常被称为细胞程序死亡（programmed cell death， PCD）。凋亡细胞将被吞噬细胞吞噬。 蝌蚪尾的消失 　　 脊椎动物的神经系统的发育 发育过程中手和足的成形过程 细胞凋亡的生理和病理学意义 生理学意义 1. 生长发育：组织与器官的塑造（趾的分化）；动物变态；皮肤角质形成； 2. 免疫细胞分化：克隆选择； 3. 防御：清除衰老细胞、DNA损伤的细胞、和被病原体感染的细胞。 病理学意义 1. 病原体侵染； 诱导凋亡——HIV 抑制凋亡——Poxvirus 2. 细胞凋亡不足 肿瘤，自身免疫疾病； 3. 细胞凋亡过度 神经退行性疾病（AD，帕金森症）、心肌梗塞、 再生障碍性贫血、骨组织坏死。 胸腺细胞 正常 凋亡 细胞凋亡的形态学和生物化学特征 胸腺细胞 正常 凋亡 细胞凋亡的形态学和生物化学特征 坏死细胞 凋亡细胞 细胞凋亡的形态学特征 细胞凋亡的生化特征 诱导细胞凋亡的因子 ◆物理性因子，包括射线（紫外线， 射线等），较温和的温度刺激（如热激，冷激）等 ◆化学及生物因子：包括活性氧基团和分子，DNA 和蛋白质合成的抑制剂，激素，细胞生长因子，肿瘤坏死因子（TNF），抗Fas/Apo-1/CD95抗体等 细胞凋亡的检测方法 1.形态学观测：染色法、透射和扫描电镜观察 2. DNA电泳——ladder 3. 流式细胞技术 4. 彗星电泳法（comet assay） 5. Annexin V 检测细胞膜外表面PS(磷脂酰丝氨酸) 6. TUNEL测定法，即DNA断裂的原位末端标记法 彗星电泳法 Annexin V 检测细胞膜外表面PS / 区别点 细胞凋亡 细胞坏死 起因 生理或病理性 病理性变化或剧烈损伤 范围 单个散在细胞 大片组织或成群细胞 细胞膜 保持完整，一直到形成凋亡小体 破损 染色质 凝聚在核膜下呈半月状 呈絮状 细胞器 无明显变化 肿胀、内质网崩解 细胞体积 固缩变小 肿胀变大 凋亡小体 有，被邻近细胞或巨噬细胞吞噬 无，细胞自溶，残余碎片被巨噬细胞吞噬 基因组DNA 有控降解，电泳图谱呈梯状 随机降解，电泳图谱呈涂抹状 蛋白质合成 有 无 调节过程 受基因调控 被动进行 炎症反应 无，不释放细胞内容物 有，释放内容物。 常用检测细胞凋亡的染料： 二乙酸荧光素（FDA），绿色荧光，活细胞染色。 Hoechst 33342或33258，DAPI，吖啶橙（AO），半通透，凋亡和固定后的细胞荧光较强。 溴化乙啶（EB）、碘化丙啶（PI）、放线菌素D（7-AAD），不通透，正常和凋亡细胞拒染。 可用不同性质的染料对凋亡细胞进行双染色。 细胞凋亡的分子调控机理 线虫(C.elegans)凋亡研究发现ced3,ced4基因促进细胞凋亡，ced9基因阻止ced3/ced4的激活，抑制细胞凋亡。 Caspase家族与凋亡 ◆Caspase家族 Caspase活性位点是半胱氨酸(Cysteine)，裂解靶蛋白位点是天冬氨酸残基后的肽键，因此称为Cysteine aspartic acic specific protease，即Caspase. Caspase1即ICE(白介素-1b转换酶),是Ced3在哺乳动物细胞中的同源蛋白. Caspase classification（Zimmermann 2001） Executioner or effector Autocatalytic initiator Caspase家族与凋亡 Ca