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肿瘤放射治疗学 备课笔记（讲稿） 内容 教师 班级 时间 1 第六章 临床放射生物学研究的主要方法 第一节 细胞存活的测定方法 一、 辐射所致细胞死亡的定义 几百戈瑞的大剂量照射之后，所有细胞机能都中止，最终发生细胞溶解，这种情况被认为是细胞即刻死亡或间 期死亡；用较低的几个戈瑞照射正在分裂或还能进行分裂的细胞（如骨髓细胞系、皮肤或小肠隐窝） ，此时部分细胞 丧失其分裂或增殖能力。 细胞死亡定义为细胞不可逆的丧失增殖能力，即在下一次或以后的有丝分裂时发生增殖性死亡。因此，子代细 胞形态完整而不能发育的受损细胞也许依然能合成蛋白质或 DNA ，并可能通过一次或几次有丝分裂，然而只要这种 细胞失去无限分裂能力则其后代肯定死亡，那么按上述定义都应认为该细胞已死亡。 另一方面，存活细胞或能够生存发育的细胞是指保持细胞增殖能力，并能够因此而形成集落或克隆的细胞，这 些细胞称为克隆源性细胞。在体内，肿瘤和正常组织只有一小部分细胞属于克隆源性细胞，受照后期数量迅速减少。 上述细胞死亡定义对放射治疗具有特殊意义，因为肿瘤细胞即使全都依然存在，但失去了无限增殖能力，并因此而 失去了局部浸润或远地转移的能力，这样也就达到局部控制的目的。同样，对于正常组织，大多数急性和慢性放射 效应都发生在丧失生存发育能力的情况下。 因此，必须指出的是在药物离体实验中用得较多的 MTT 细胞存活测定方法， 也曾试图用于检测细胞的放射效应， 但终因 MTT 法反映的细胞“死亡” ，不是辐射所致的“细胞增殖性死亡” ，从而未能被放射生物学所接受。 二、离体细胞存活实验 1 ． 细胞存活率 以不同剂量照射培养瓶内的群体细胞后，将这些细胞制成单细胞悬液种植到平皿内，或将不同类型的单细胞先 种植到平皿内再照射。照射后，根据不同细胞系的生长速度，培养一定时间后可见到下列几种现象： ⑴ 一些细胞依然以单细胞形式存在，不分裂； ⑵ 一些细胞可以完成一次或两次分裂，形成很小的、发育不全的集落（克隆） 。这些克隆内的细胞数均达不到 50 个； ⑶ 一些细胞仍能生长成大集落，尽管这些集落体积大小不一，但与未照射的对照集落没什么差别。这些克隆反 映了照射后在平皿内仍能分裂的细胞，即能保留无限增殖能力的存活细胞。计数这些仍保持着无限增殖能力的克隆 比例数，就可以算出各个照射剂量点的细胞存活率 (survival fraction, SF) 。 SF=某一剂量照射实验组的克隆数 / （该组细胞种植数× PE ） PE 为未照射细胞克隆形成率， PE = （未照射细胞克隆形成数 /细胞种植数）× 100% 根据实验细胞的放射敏感性和不同照射剂量，调整所需接种的细胞数。随着照射剂量增高需相应增加接种的细 胞数。对于照射剂量的选择，也应根据实验所用细胞系的放射敏感性而异。 2 2 ． 细胞存活曲线 以剂量为横坐标（线性标度） ，存活率为纵坐标（对数标度） ，不同剂量的存活率通过特定的数学模式拟合，可 得该细胞系半对数坐标的细胞存活曲线，即细胞剂量效应曲线。该方法建立于 20 世纪 60 年代，但在技术和数据处 理方法都不断的有所改进，至今仍被认为是反映照射后离体细胞存活情况的最好手段。 细胞群无论是指数生长期还是在相对密度生长期都可以照射。指数生长期细胞是指在培养液内接种少量细胞， 它们全都处于增殖状态，其数量成指数性增长。相对密度生长期是指细胞在平皿中没有被稀释再接种，以致细胞密 度很高，出现接触抑制，细胞基本停止分裂，进入静止期。 3 ． 离体细胞的乏氧照射技术 在放射生物学研究如何改进放射治疗的效果时，在离体细胞实验中，有氧细胞和乏氧细胞对某一措施的反映性 是经常需要观察的内容之一， 在放射增敏剂的研究中更是需要。 通常用氧增强比 (oxygen enhancement