十五β—内酰胺类抗生素已.pptVIP

萃取过程 正相萃取：酸化pH1.8-2.0，滤液：醋酸丁酯＝1：0.3，碟片式离心机分离（浓缩1.5-2.1） 反相萃取：pH6.8-7.4（磷酸盐、碳酸盐缓冲液）。把青霉素从丁酯中提取到缓冲液中。 反复萃取2－3次，达到结晶要求。 萃取条件：10℃下。萃取罐冷冻盐水冷却。 4、脱色 萃取液中添加活性炭，除去色素 过滤，除去活性炭。 5、结晶——直接结晶 加醋酸钠－乙醇溶液反应：得到结晶钠盐。 加醋酸钾－乙醇溶液：得到青霉素钾盐。 5、结晶——共沸蒸馏结晶 萃取液，再用0.5 M NaOH萃取 pH6.4-6.8下得到钠盐水浓缩液。 加3-4倍体积丁醇，16-26℃，真空0.67-1.3KPa）下蒸馏。 水和丁醇形成共沸物而蒸出。钠盐结晶析出。 结晶经过洗涤、干燥（60℃真空16h），磨粉，装桶，得到青霉素产品。 思考题： 青霉素发酵参数的控制 影响青霉素发酵产率的因素 头孢菌素C和青霉素的合成途径有何异同 顶头孢霉的硫代谢在发酵上的表现 头孢菌素C发酵中对氧的要求 青霉素发酵液的溶剂萃取工艺 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 * 7-氨基头孢烷酸（7-ACA） 母核6-氨基青霉烷酸(6-APA) * 2.为了便于观察细菌，把细菌体染成蓝、红、紫等颜色。 染色是生物显微玻片标本制作中最重要的环节之一。通过染色，将生物组织浸入染色剂内，使组织细胞的某一部分染上与其他部分不同的颜色或深度不同的颜色，产生不同的折射率，以便观察。 最常用的是苏木精和伊红染色法。苏木精为碱性染料，将细胞质和胞质内某些结构染成蓝色。我们称这种能被苏木精染蓝的性质为嗜碱性。伊红为酸性染料，将细胞质和细胞间质染成红色。我们称这种能被伊红染红的性质为嗜酸性。染色深浅可反映嗜碱性和嗜酸性强弱。若对两种染料缺乏亲和力，则称为嗜中性。有些组织成分可以显示与染料颜色不同的颜色，当用蓝色碱性染料甲苯胺进行染色时，组织中的糖胺多糖成分被染成紫红色，此种显色与染料颜色不同的现象成为异染性。 另外，银染法也较常用。当组织块浸入硝酸银溶液中时，有的组织结构能直接把硝酸银还原，使银粒附于其上，呈棕黑色或棕黄色。有些结构本身对硝酸银无直接还原能力，若加入还原剂，可使硝酸银还原沉淀显色。 大多数次级代谢产物在此期合成,大多数细胞都出现大的空泡.有些菌丝体还会发生自溶菌丝体,这与菌种和培养条件有关. * * (一)生物合成概述 头孢菌素C也是由α-氨基己二酸、半胱氨酸和缬氨酸经三肽途径生物合成的，而且，在异青霉素N以前的阶段和青霉素的生物合成完全一样。 此后，经顶头孢霉产生的异构酶作用，将异青霉素N转化为青霉素N，再由扩环酶(脱乙酰氧头孢菌素C合成酶)催化扩环生成脱乙酰氧头孢菌素C，最后通过羟化和转乙酰基反应得到头孢菌素C。 * (一)生物合成概述 头孢菌素C也是由α-氨基己二酸、半胱氨酸和缬氨酸经三肽途径生物合成的，而且，在异青霉素N以前的阶段和青霉素的生物合成完全一样。 此后，经顶头孢霉产生的异构酶作用，将异青霉素N转化为青霉素N，再由扩环酶(脱乙酰氧头孢菌素C合成酶)催化扩环生成脱乙酰氧头孢菌素C，最后通过羟化和转乙酰基反应得到头孢菌素C。 * (一)生物合成概述 头孢菌素C也是由α-氨基己二酸、半胱氨酸和缬氨酸经三肽途径生物合成的，而且，在异青霉素N以前的阶段和青霉素的生物合成完全一样。 此后，经顶头孢霉产生的异构酶作用，将异青霉素N转化为青霉素N，再由扩环酶(脱乙酰氧头孢菌素C合成酶)催化扩环生成脱乙酰氧头孢菌素C，最后通过羟化和转乙酰基反应得到头孢菌素C。 * 葡萄糖等快速利用的碳源阻遏头孢菌素C的生物合成。在较高的葡萄糖浓度下，青霉素N的积累增加而头孢菌素C的产率下降，说明葡萄糖主要阻遏扩环酶的生成，而不影响异青霉素N合成酶。只有当葡萄糖接近于耗尽 时，头孢菌素C才能大量合成。高浓度的磷酸盐助长了这种碳源阻遏。碳源限制流加补料发酵可显著提高头孢菌素C的产率，减少青霉素N的积累，即使在高浓度磷酸盐存在下也不例外。在分批和补料分批发酵中，用代谢慢的植物油做碳源也可以避免碳源阻遏 * 头孢菌素C是不稳定的化合物，在发酵过程中存在①非酶降解，且头孢菌素C浓度↑，绝对降解量逐渐↑； ②同时，由于乙酰酯酶的存在，部分头孢菌素C被转化为脱乙酰头孢菌素C。这将对头孢菌素C的回收造成不利的影响。 ③另外，随着发酵时间的延长，由于菌丝形态的变化及自溶，发酵液将变得难以过滤。 * 用头孢菌素C为原料通过两种方法得到7-ACA，酶水解法和化学裂解法。酶水解法难度大，应用困难；化学裂解法虽操作复杂，生产设备要求高，“三废”处理工作量大，但其生产工艺比较稳定成熟，收率也能达到较高水平，因此应用广泛。工艺过程如下： ?酯化 ?