CK2参与调控肺癌细胞中TGFβ通路的研究.docxVIP

CK2参与调控肺癌细胞中TGF- B通路的研究 (1辽宁省大连市第五人民医院胸外二科辽宁大连116021) (2广东省中山大学肿瘤防治中心胸外科510060) (3美国加州大学旧金山海伦迪勒癌症中心胸外科94143) 【摘要】蛋白激酶CK2在多种人类恶性肿瘤细胞中处于过表达状态。 TGF?beta;信号通路在肺癌中失调控，并被证实与肿瘤转移及患者不良预后密切 相关。木研究表明，在人类非小细胞肺癌(NSCLC)细胞中，CK2正性调控TGF-beta; 信号通路。首先我们证实，TGF-beta;信号通路转录因子Smad2在原发肺癌组织 标木中表达升高；然后我们发现，在NSCLC细胞系中，抑制CK2可以下调Smad2 表达及水平及转录活性,继而下调多种TGF?beta;信号通路靶基E(TGFbeta;lll, GDF11, KLF10)表达水平。在划痕实验中,抑制CK2alpha;后,NSCLC细胞表现 出更低的侵袭牛长潜能；接下来，我们证实Smad2表达及转录活性均下调，通 路靶基因表达水平下降；进一步的蛋白降解实验表明，抑制CK2alpha;促进 Smad2蛋白降解。我们首次报道，在NSCLC中,CK2正性调控TGF■beta;信号通 路，抑制CK2可下调TGF-beta;信号通路活性。 【关键词】CK2alpha;； TGF?beta;信号通路;CX-4945； Smad2；非小细胞 肺癌(NSCLC) 【中图分类号】R73-3 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231 (2016) 27-0066-03 ?研究背景 CK2 酪蛋白激酶2 (casein kinase 2)是一类能催化肽链中邻近酸性氨基酸残基的 丝氨酸/苏氨酸磷酸化的酶，具有广谱底物特异性，在细胞的牛存、牛长、转化、 增殖和肿瘤的发牛中都发挥了重要的作用，一旦失调，细胞无限增殖，产生癌变 lo在包括肺癌的多种恶性肿瘤中，过表达的CK2alpha;可以作为提示预后不良 的因素2。研究表明,CK2调控肿瘤细胞内多种信号传导,如PI3K, NFkB, Wnt3。 近年来，已有多种针对CK2的抑制物被开发，其中CX-4945 （特异性小分子抑制 剂）和CIGB-300 （多肽类抑制物），已进入一期临床试验，其疗效及安全性也初 步被证实。 TGF?beta;信号通路与肿瘤发生发展 转化生长因子-beta; （transforming grouth factor-beta;, TGF■beta;）在多 种生物学行为（如细胞增殖、癌症转移）中发挥着重要的作用。TGF-beta;l是 目前研究得最深入活跃的一型，通过一系列激活过程，TGF-beta;l与相应受体 结合进行信号传导，通过下游的信号调节蛋白Smad2和Smad3对靶基因进行调 节4。在肿瘤发生的早期阶段，TGF-beta;信号抑制上皮细胞生长，在癌症进展 期，TGF?beta;失去对细胞生长的抑制作用5。 CK2 与 TGF-beta; 在人类恶性肿瘤中，CK2通过磷酸化机制参与多种信号通路的调控。本项研 究探讨人类肺癌细胞中CK2与TGF-beta;iffl路的关系，并对其可能的调控机制进 行研究，寻找更有效地肿瘤治疗靶点，并为CK2靶点药物的应用提供新的理论依 据。 ?研究方法 2.1细胞培养、小分子处理、免疫组织化学 人类非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系在含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基 中生长。以不同浓度的CK2小分子抑制剂处理细胞，培养48小时后收集细胞。 标本来自于大连市第五人民医院原发肺癌患者的手术切除。应用Anti-Smad2 和anti-phosphorylated Smad2抗体对标本进行染色，使用如下评分系统：■，不染 色；+,弱染色；++,中染色；+卄‘强染色。 2.2 siRNA、质粒DNA转染 以 CK2alpha;siRNA和对照siRNA分别处理细胞，使用 Lipofectamine RNAiMAX 进行转染；质粒选用 pcDNA3.1-CK2alpha;和 control pcDNA3.1-LacZ,转染 48 小 吋后收集细胞进行RNA及蛋白分析。 2.3RNA提取、实吋定量荧光PCR、Western Blot分析 收集 RNA,定量检测基因包括 Smad2、TGFbeta;lll、GDF11 KLF10、Smad7o BCA法测定蛋片含量，一-抗选用anti-Smad2和anti?GAPDH。经二抗处理后，蛋 白检测应用ECL印记分析系统进行发光分析。 2.4荧光素酶报告基因分析 将野生型Smad和突变型Smad质粒转染至细胞内，共转染管家基因Renilla luciferase pRL-TK质粒。24小时后进行荧光检测。 2.5统计分析 数据分析使用三次