荧光免疫技术.pdf

第八章 荧光免疫技术 第一节 概述 　一、荧光的基本知识 　二、荧光物质 第二节 荧光抗体技术 　一、标本的制作 　二、荧光抗体的制备 　三、荧光抗体染色与结果判断 　四、荧光显微镜的基本结构 第三节 荧光免疫分析的类型 　一、时间分辨荧光免疫测定 　二、荧光偏振免疫测定 　三、荧光酶免疫测定 第四节 荧光免疫技术在医学检验中的应用 　一、荧光抗体技术的应用 　二、荧光免疫测定的应用 思考题 小结 第一节 概 述 一、荧光的基本知识 荧光（fluorescence ） 荧光物质吸收激发光的能量后，电子从基态跃 迁到激发态，当其回复至基态时，以发射光形式释 放出能量，称为荧光。 荧光的基本知识 发射光谱和激发光谱 发射光谱是指固定激发波长，在不同波长下记录的样 品发射荧光的强度。 激发光谱是指固定检测发射波长，用不同波长的激发 光激发样品记录的相应的荧光发射强度。 荧光的基本知识 荧光效率 定义:荧光物质分子将光能转变成荧光的百分率 计算公式: 发射荧光的光量子数（荧光强度） 荧光效率= 吸收光的光量子数（激发光强度） 荧光的基本知识 荧光寿命 定义:荧光物质被激发后所产生的荧光衰减到一定程 度时所用的时间。 各种荧光物质的荧光寿命不同。 荧光的基本知识 荧光淬灭 定义:荧光物质在某些理化因素作用下，发射荧光减弱甚至 消退称为荧光淬灭。如紫外线照射、高（≥20℃）、苯胺、 - 酚、硝基苯、I 等 。 荧光的基本知识 荧光偏振 F －F H L P ＝────── 　　　　　F ＋F H L 二、荧光物质 荧光物质是一类能吸收激发光的光能而发射荧光的物质。 常用的荧光物质 荧光物质 最大吸收光谱 最大发射光谱 应用 异硫氰酸荧光素 490 ～495nm 520 ～530nm （黄绿色）FAT、荧光偏振免疫测定 (FITC) 四乙基罗丹明 (RB200) 570 ～575nm 595 ～600nm （橙红色） FITC的衬比染色或双标 记FAT 四甲基异硫氰酸罗丹 550nm 620nm （橙红色） FITC的衬比染色或双标 明 (TRITC) 记FAT 藻红蛋白（PE ） 490-560nm 595nm （红色） 双标记FAT、流式细胞术 7-氨基-4-甲基香豆素 354nm 430nm （蓝色） 双标记或多标记FAT 3+ Eu 螯合物 340nm 613nm 时间分辨荧光免疫测定 第二节 荧光抗体技术 荧光抗体技术的基本原理 荧光素标记抗体与切片