棉花纤维优势表达ghprp10基因的克隆及功能初步分析-遗传学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 棉花纤维优势表达 棉花纤维优势表达 GhPRP10基因的克隆及功能初步分析 Cloning and Functional Preliminary Analysis of Fiber Enriched Gene GhPRP10 in Gossypium hirsutum A Dissertation Submitted to Shihezi University In Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Natural Science By Shi Miao (Genetics) Dissertation Supervisor：Prof. Sun Jie June， 2015 棉花纤维优势表达 棉花纤维优势表达 GhPRP10基因的克隆及功能初步分析 棉花纤维优势表达 棉花纤维优势表达 GhPRP10基因的克隆及功能初步分析 摘 要 棉花是世界上重要的经济作物。棉纤维作为棉花的主要产品，已经成为纺织业的重要原料之一， 纺织品的质量和效益取决于棉纤维的品质。因此，棉花分子育种研究的首要任务是提高棉纤维品质。 棉纤维是由棉花胚珠表皮细胞分化和发育形成的单细胞，其伸长率和最终长度远超过其它植物细胞， 是研究植物细胞伸长和细胞壁生物合成的理想模型。棉纤维发育相关基因的克隆及其分子机制的研 究，为利用基因工程技术提高棉纤维品质提供重要的理论依据和应用价值。 富含脯氨酸蛋白（prolin-rich protein）是一类富含脯氨酸和羟脯氨酸的细胞壁结构蛋白,它不仅能 够抵御外界病原菌的侵害、响应激素诱导和非生物胁迫，还能够调控植物的生长发育。本研究利用 电子克隆结合 RT-PCR 技术，从 12DPA（开花后天数）棉纤维中克隆到一个编码富含脯氨酸蛋白 (proline-rich proteins, PRPs)基因，命名为 GhPRP10（登录号 KP036633）。研究该基因在棉花不同组 织中的表达情况，通过转化不同模式生物进行表型观察，对该基因的功能进行初步分析，结果如下： 1. 该基因具有 687bp 的开放阅读框，共编码 228 个氨基酸，其中脯氨酸(Pro)含量为 34.6%。序 列分析发现 GhPRP10 蛋白具有 N 端信号肽和富含脯氨酸区域，属于第一类 PRPs。 2．实时荧光定量 PCR (quantitative real-time PCR)结果显示，GhPRP10 在棉纤维组织中优势表达， 且受棉纤维发育调控，在纤维发育过程中的表达量呈现先升高后降低的趋势，在 18DPA 纤维中表达 量最高，在 21-27DPA 纤维中表达量保持较高水平。因此推测该基因在纤维伸长和次生壁合成过程 中发挥作用。 3．为进一步研究 GhPRP10 基因在棉花纤维发育过程中功能，通过 Gateway 技术构建植物过 量表达载体，并通过农杆菌介导的遗传转化法分别转化烟草 BY-2 悬浮细胞、SR1 烟草、哥伦比亚 拟南芥（Columbia）。通过观察 BY-2 细胞形态和测量细胞长度，结果显示转基因 BY-2 细胞显著长 于野生型细胞，表明该基因能够促进细胞伸长。通过测定拟南芥根长和植株叶面积，数据处理和统 计学分析结果显示转基因拟南芥的整个植株的叶面积显著大于野生型的叶面积，转基因株系拟南芥 根显著长于野生型，表明该基因不仅能够促进叶片的生长发育，而且能够促进拟南芥的根毛伸长， 从而确定该基因在植物的生长发育方面发挥作用。构建绿色荧光蛋白 GFP 融合载体，通过烟草叶 片的瞬时表达显示该基因定位在细胞边缘。将干扰载体和过量表达载体转化棉花 YZ-1，获得抗性植 株，为进一步研究该基因在棉纤维中的功能奠定基础。 关键词：棉纤维，富含脯氨酸蛋白，功能研究，Gateway 技术，实时荧光定量 PCR I II万方数据 II 万方数据 棉花纤维优势表达 棉花纤维优势表达 GhPRP10基因的克隆及功能初步分析 Abstract Cotton is an important cash crop in the world. As the main product of cotton, cotton fibers have been become an important material for the textile industry, and its quality affects quality and efficiency of textile . Therefore, it has been the primary task of cotton molecula