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第 17卷第4 期 过 程 工 程 学 报 Vol.17 No.4
2017 年 8 月 The Chinese Journal of Process Engineering Aug. 2017
生化工程 DOI: 10.12034/j.issn.1009-606X.216364
丝氨酸蛋白酶催化结构域无活性突变体的表达、纯化与结晶
1,3 2 2 2
郭团玉 ， 赵宝玉 ， 袁 彩 ， 黄明东
(1. 宁德师范学院生物系，福建 宁德 352100 ；2. 中国科学院福建物质结构研究所，福建 福州 350007 ；
3. 特色生物化工材料福建省重点实验室，福建 宁德 352100)
摘 要：构建了丝氨酸蛋白酶 Matriptase 的催化结构域无活性突变体质粒 S195A，并在酵母中表达，通过阴离子柱粗捕获及分
子筛和离子交换柱纯化得到高纯度重组蛋白，通过气相扩散法得到无活性突变体的晶体. 结果表明，与野生型相比，单点突变
极大程度提高了 Matriptase 的表达，Matriptase 无活性突变体不具有水解底物活性，但仍可与抑制蛋白 HAI-1 结合. 晶体分辨率
为 1.48 Å，195A 突变没有影响 Matriptase 的构象.
关键词：丝氨酸蛋白酶；表达；晶体生长
中图分类号：Q556.9 文献标识码：A 文章编号：1009606X(2017)04083405
Expression, Purification and Crystallization of Inactivated Serine Protease Domain of Matriptase
1,3 2 2 2
Tuanyu GUO , Baoyu ZHAO , Cai YUAN , Mingdong HUANG
(1. Department of Biology, Ningde Normal University, Ningde, Fujian 352100, China;
2. Fujian Institute of Research on the Structure of Matter, Chinese Academy of Sciences, Fuzhou, Fujian 350002, China;
3. Fujian Provincial Key Laboratory of Featured Materials in Biochemical Industry, Ningde 352100, China)
Abstract: An inactivated mutant of matriptase serine protease domain (S195A) was constructed, and the recombinant protein in Pichia
pastoris was expressed. After captured by anion exchange chromatography, the recombinant protein was further purified
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