施陶丁格连接在生物标记中的应用.docVIP

施陶丁格连接在生物标记中的应用 徐凡1，郜炎龙1，吴超柱1，姜和1,2 (1.重庆理工大学药学与生物学院，重庆，400050；2.重庆前沿生物技术有限公司，重庆, 400041) 摘 要：在生物正交反应中，叠氮化物和膦所进行的施陶丁格连接反应在各种复杂的生物系统中扮演着重要的角色。例如，施陶丁格连接已被用于聚糖、脂类、DNA和蛋白质的标记。此外，施陶丁格连接也作为一种合成方法被用于构造糖肽类、微阵型和功能性的生物大分子。在生物正交的新兴领域中，各种最新的技术往往用来与施陶丁格连接树立的高标准作为比较。以下这篇综述总结了目前施陶丁格连接的发展和在生物标记领域的应用趋势。 关键词：施陶丁格连接；叠氮化合物；生物正交反应；生物标记 中图分类号： 文献标识码：A Application of the Staudinger Ligation in Bio-Labeling Abstract: In bio-orthogonal reaction, the azide and the phosphine functions has resulted in the Staudinger ligation playing an important role in a variety of complex biological systems. For?instance, the Staudinger ligation has been used for labeling glycans, lipids, DNA, and proteins. Moreover, also as the Staudinger ligation method is used to construct glycopeptides, microarrays, and functional biopolymers. In the emerging field of bio-orthogonal, the Staudinger ligation has set a high standard to which most of the new techniques are often compared. This Review summarizes recent developments of the Staudinger ligation and its application trends in the field of biological labeling. Keywords: staudinger ligation; the azide; bio-orthogonal reaction; biolabeling 1. 引言 1919年，德国化学家赫尔曼·施陶丁格(Hermann Staudinger) 首先发现并报道了叠氮化物和膦之间的反应。直到最近几年，Bertozzi教授和他的团队发现了该反应有可作为生物偶联的潜力，并成功将其转化为所谓的施陶丁格连接(Staudinger ligation)。多年来，一些生物合成技术——比如共价键连接的荧光探针技术、亲和标记技术，以及不同的(生物)分子同位素标记技术得到了实质的发展。通过使用不同的偶合方法，已经实现了在生理条件下的各种生物分子(如蛋白质，聚糖和DNA)的修饰、细胞表面标记和蛋白质的固定化的修饰。一般情况下，建立在体外的生物偶联策略——如硫醇马来酰亚胺的酯偶合反应，被应用于构建所需的生物化合物。但是在体内环境中，大量多种类的竞争性亲核物质和亲电物质存在于蛋白质、聚糖和成千上万的小的有机代谢产物上，它们在复杂的生物系统中阻碍着这种技术的应用。近几年来，一些特异性位点技术、生物正交技术和偶联技术为了克服在体内标记中所遇到的问题[1]，得到了快速的发展[2,3]。在机体环境中，特异性位点的结合需要独特的活性官能团，但体内并不存在这些所需的官能团。虽然这些独特的生物正交反应介导所需的官能团非机体本身所携带，但其能在生物系统中通过高度选择性反应去进行修饰所得到[4]。最常采用的介导是用于生物正交共轭技术中的叠氮化合物[5]。叠氮化合物在生物系统内极为罕见，且其化学惰性决定了它在生理条件下的高度稳定性。理所当然的是，叠氮化合物已被用于一些生物偶联策略，包括施陶丁格连接[6]、亚铜催化的叠氮和炔烃的环加成(CuAAC)反应[7,8]，和近几年出现的各种催化环加成反应如环辛炔[9,10]和dibenzocyclooctynes[11]。虽然叠氮化物在环加成反应中会产生一个稳定的三氮唑桥(图示1)，但在施陶丁格连接中叠氮化物和膦试剂的反应会生成稳定的酰胺键。Saxon和Bertozzi教授发现了施陶丁格反