饲料中牛,羊,猪,鸡源性成分的PCR检测方法及其应用.docVIP

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2019-06-28 发布于四川
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饲料中牛,羊,猪,鸡源性成分的PCR检测方法及其应用.doc

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PAGE 2118 中国农业科学 41卷 7期罗家琴等：饲料中牛、羊、猪、鸡源性成分的PCR检测方法及其应用 PAGE 2119 中国农业科学 2008,41(7):2112-2119 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.07.032 收稿日期：2007-04-13；接受日期：基金项目：国家科技支撑计划（2006BAD04A08），农业部无公害农产品质量检测项目作者简介：罗家琴（1979-），女，重庆人，硕士研究生，研究方向为生物技术。Tel：010E-mail： ljiaqin@163.com。通讯作者王加启（1967-），男，安徽宿州人，研究员，研究方向为动物营养与饲料科学。Tel：010Fax：010E-mail：wang-jia-qi @263.net 饲料中牛、羊、猪、鸡源性成分的PCR检测方法及其应用罗家琴，王加启，卜登攀，李旦，王丽，魏宏阳，周凌云（中国农业科学研究院北京畜牧兽医研究所/动物营养学国家重点实验室/农业部奶及奶制品质量监督检测测试中心，北京 100094）摘要：【目的】建立鉴定饲料中牛、羊、猪、鸡源性成分的PCR方法，进一步完善现有的动物源性饲料检测方法。【方法】根据牛、羊、猪、鸡、鱼以及马的mtDNA的16S rRNA基因序列选用了一对通用引物，初步检测出含有动物源性成分的样品；然后针对牛、羊、猪、鸡4种动物线粒体mtDNA中的保守序列，分别选用了4对特异性引物对检测出的样品进行PCR扩增，扩增的目的片段大小分别为271、274、149和266 bp。【结果】通过利用通用引物、优化PCR反应体系及其条件，建立了从未知样品中简便而快速的检测出是否含有动物源性成分的PCR方法；利用所选的针对不同动物的特异性引物，建立了鉴定牛、羊、猪、鸡这4种动物源性成分的方法，此方法最低检测限可达0.1%。【结论】建立的检测饲料中动物源性成分的方法操作简便，价格低廉，结果准确，可靠，可作为饲料中动物源性成分的鉴定方法之一。关键词：动物源性饲料；敏感性和特异性检测；PCR；引物 Development and Application of a PCR Detection of Bovine, Sheep, Pig and Chicken Derived Materials in Feedstuff LUO Jia-qin, WANG Jia-qi, BU Deng-pan, LI Dan, WANG Li, WEI Hong-yang, ZHOU Ling-yun (Institute of Animal Science, State Key Laboratory of Animal Nutrition, Chinese Academy of Agricultural Scienc/ Milk and Dairy Quality Supervision, Inspection and Evaluation Center, Ministry of Agriculture, Beijing 100094) Abstract: 【Objective】A PCR detection of bovine, sheep, pig and chicken derived materials in feedstuff was established to improve the existing method. 【Method】 Firstly, general primer was designed according to 16S rRNA gene sequence of bovine, sheep, pig, chicken, fish and horse mtDNA in order to detect animal derived materials in feedstuff. Species-specific primers were designed according to conserved sequence of mtDNA of bovine, sheep, pig and chicken and were used for amplification of a 271, 274, 149 and 266 bp fragments respectivel