实验核医学（第四章）.pptVIP

影响碘化反应因素： 1.可结合基团数量，及暴露程度； 2.氧化剂性质、反应条件(pH、浓度、温度、反应时间)。 一般来说，在保证一定标记率得前提下，尽可能减少氧化物得用量，以保证标记物得生物活性和免疫活性。 碘化反应种类： 1.氯胺-T法： 方法简便，标记率高，重复性好，试剂易得，是迄今最常用方法之一。 Cl-T（N-氯代对甲苯磺酰胺钠盐）：性质温和，在水溶液中水解产生次氯酸，次氯酸氧化碘离子成碘分子。 注意事项： ①氧化剂Cl-T不稳定，临用时配置； ②用量适当； ③反应完需用等量的还原剂偏重亚硫酸钠（Na2S2O5)中和,临用时配置； ④pH在7～8，常用0.2～0.5M磷酸缓冲液； ⑤反应体积适当，50～300μl； ⑥温度和时间，室温1～3min，若4℃，增加时间； ⑦不适用于生物活性不稳定物质，如一些补体、某些激素、酶、受体等。 2.乳过氧化物酶法（LPO）： 过氧化物酶作用于H2O2，放出新生态氧，氧化125I-为碘分子。常用乳过氧化物酶。 注意事项： ①用量少，为待标记蛋白的1％； ②pH范围较宽，4～8.5； ③H2O2用量少； ④反应时间30～60min ⑤也能用于各种脂肪、细胞、细胞膜的标记； ⑥过氧化物酶来源困难，标记率低； ⑦酶本身也可能被标记而产生杂质。 第四章 放射性核素标记化合物 第一节 基本概念 1.放射性浓度──单位体积溶液中含有的放射性活度，Bq/L、Bq/ml。 2.放射化学纯度──放射性标记化合物的放射性活度占该样品的总放射性活度的百分比。 3.放射性比活度──单位质量放射性物质的放射性比活度。重要参数，根据实验设计要求。 4.同位素标记──各种化合物上的元素被该种元素的放射性同位素所取代的标记。 5.非同位素标记──利用性质接近的放射性核素代替需标记化合物上的元素的标记。 6.定位标记──把放射性核素标记到化合物指定位置上的标记。 7.非定位标记──无法确定放射性核素标记到化合物上的某部位的标记。 全标记（一般标记）──标记化合物上原子被取代的机会均等的标记。 准定位标记──在定位标记时，由于中间过程，可能也标记在其它位置上的标记。 第二节 标记化合物的制备 一、放射性核素的选择 1.基本不改变原有化合物的物理化学性质； 2.标记核素与化合物的结合牢固、稳定性好； 3.合适的半衰期； 4.射线容易测量； 5.其它，标记难易、价格、防护等。 二、考虑因素 1.原材料及其价格； 2.标记物的稳定性； 3.微量操作技术； 4.冷试验； 5.防护措施及防污染、废物处理方案。 三、基本方法 1.同位素交换法：某一放射性核素或其化合物与待标记化合物中相同元素的非放射性核素进行交换反应。 2.化学合成法：应用放射性核素的原原料，通过各种化学反应，将放射性核素合成到待标记化合物的特定位置上。 3.生物合成法：全生物合成──利用生物的生理代谢作用，将简单的放射性原料转化成所需的标记物； 酶促合成──利用酶的生物活性，将放射性前体转变为所需的标记物。 4.络合物/鳌合物生成法：将放射性金属离子和具有特定功能的化合物进行络合或鳌合反应。利用了金属离子易生成络合物或鳌合物的原理。 第三节 常用标记化合物的制备 C、H──生命物质的主要组分，生命科学中常用14C、3H来标记所需化合物。 125I ──性质活泼，易与蛋白质和多肽发生取代反应，且发射的γ射线易测量。 P、S──核酸、蛋白质的组成元素， 32P、33P、35S在DNA测序等分子生物学中广泛应用。 一、14C标记化合物的制备 C的主要同位素 14C的特点： 1.半衰期长； 2.发射的β-射线能量低，可用液闪测量，易防护； 3.用于自显影，影像清晰； 4.14C的化合物较稳定，辐射自分解速度慢。 核素 半衰期 衰变方式 射线能量(MeV) 天然丰度 生产核反应 11C 20.38分 β+ 0.9608 11B(p,n) 12C 稳定 98.892 13C 稳定 1.108 14C 5730年 β- 0.155 14N(n,p) （一）14C标记化合物的化学合成 起始原料：Ba14CO3或14CO2 中间体：由原料经一步或两步反应制得简单14C标记物 例1：制备14C标记的维生素K2 例2：[1-14C]-乙酸的制备 方法1： 方法2： 核素标记的位置一般根据实验目的而选择。 例3： 例4： β-14C-丝氨酸 14C-甲酸 甘氨酸 化学合成法的优点： 能定位标记； 纯化较容易； 放射性比活度高。