课件：DNA多态性及其分析技术.pptVIP

4.分析扩增DNA片段序列的多态性 对DNA扩增后进行序列分析。 不对称PCR ssDNA 测序分析比较 5.随机引物PCR法分析DNA的多态性 RAPD是随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA)的英文缩写。该法最初是由Williams等发明，其方法是用随机序列的9～10个核苷酸的引物，对基因组的DNA进行PCR扩增，再进行电泳分离。 采用任意顺序的引物扩增基因组DNA，可以在完全不知道特定DNA顺序的情况下分析其多态性，不仅可用于个人识别，还可用于其它各种遗传学研究。 有人建议把通过随意引物扩增的DNA顺序，称为RAPD标记，用于比较两种不同的生物的基因有否区别。 由于所有的RAPD都是显性的，所以无法区别扩增的DNA片段是来自杂合子还是纯合子。目前已有明显的迹象显示，RAPD标记具有广阔的应用范围和前景。 不但可用于基因制图，动植物培育，DNA指纹分析，而且在染色体特异DNA片段的分离鉴定、杂交细胞系或遗传原种中大段染色体的缺失或重复的筛查等诸方面也将发挥出重要作用。 其优点表现在以下几个方面： ①可以用一系列的通用引物分析不同种类的生物。 ②可用于制备探针和分析未知的DNA顺序。 ③由于每一个RAPD标记对应一种DNA顺序，可大大简化多种相关研究。 ④RAPD技术有可能使基因型的鉴别自动化，高效基因制图等工作比应用RFLP和普遍PCR技术更有效，更简便。而且人工合成的随机引物可在实验空间进行交换，这比克隆DNA片段作为探针要容易和迅速得多，还免去了DNA分子杂交的麻烦。 第四节 DNA多态性分析技术的应用 1．研究人类遗传性疾病 人类某些遗传性疾病是因某一基因的碱基序列中发生突变，使之缺失了某一限制性内切酶的识别位点，因而使用此限制性内切酶无法切出与正常人相同大小的限制性片段来；另一些疾病则表现出相反的情况，出现了原来没有的某个限制性内切酶识别位点。有时是因插入了某一个片段引起疾病。 用PCR技术分析DNA多态性还可以进行产前诊断，对那些在婴儿期或少年期发病的严重影响病人劳动生活能力的遗传性疾病在胚胎期作出确诊，采取措施终止妊娠，对优生优育显得尤为重要。 2．建立人类基因组的遗传连锁图以及对某些有遗传倾向的疾病作相关性分析 3．作为遗传标记用于单卵双生或双卵双生的诊断，亲子鉴定、法医个人识别以及人类学的研究等。 4．直接作基因分型，特别是作HLA的基因分型，可用于器官移植、免疫学的研究。 5．检测异常的有丝分裂和减数分裂。 6．建立研究昆虫及其它动、植物新的分类方法。可用于物种鉴别。 7．某些传染性疾病的病原诊断也可以用PCR法分析某些病原体（如病毒和细菌）的特异性片段及其多态性达到目的。 8．对Y染色体DNA作多态性分析是父系遗传研究的有力工具。 西红花及其伪冒品的RAPD指纹图 1.Marker 2.西班牙红花 3.印度红花 4.川红花 5.莲须 6.玉米须 7.黄花菜 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 可编辑 可编辑 第一节 多态性概述 一. 定义 不同种的生物以及同一种生物的不同个体之间都存在着许多差异，称为生物的多态现象，即生物的多态性（polymorphism）。 生物群体中个体间的变异有的是由环境因素，如营养、气候等造成的；有的则是由遗传因素造成的。由遗传因素造成的变异形成一系列的多态性，称为遗传多态性（genetic polymorphism ）。 二.标准 发生遗传分离的基因座位（locus）具有两个以上等位基因时，其最常见的等位基因的频率不超过0.95或0.99时，这个基因座位就被认为具有多态性。在某些时候，一个基因位点上只由一个基因占据，但有时这个位置上缺乏这一基因，这时就会出现“有”和“无”两种情况，被称为二态性（dimorphism）。 三.分类 遗传多态性主要可分为遗传表型的多态性和DNA的多态性两大类。 由遗传控制表现出来的性状就是遗传表型。 检测遗传表型多态性有其局限性： ①遗传表型的多态性只反映出编码基因的部分变异。后者只占人基因组总DNA的10%（＜10%）。基因及基因相关序列占总DNA的25%。 ② DNA序列中的同义突变不会引起表型的改变。这时检测表型就不能发现编码基因中存在的变异。 ③基因的表达会有变异，基因型完全相同的生物体在不同的生长条件下可能有不同的表型，靠检测表型多态性来推断基因有时会出现错误结论。 分析DNA的多态性才能真正深刻地揭示生物的多态性。 人类基因组序列概况 人类基因组 30亿碱基对 非基因序列 70%～80% 基因及相关 序列 20%～30% 编码序列 ＜10% 中度或高度 重复序列 20% ～30% 单一数或