食品分析-快猴网.ppt

* * * * * * * * * * * * 凯氏定氮法是测定总有机氮量较为准确、操作较为简单的方法之一，可用于所有动、植物食品的分析及各种加工食品的分析，可同时测定多个样品，故国内外应用较为普遍，是个经典分析方法，至今仍 被作为标准检验方法。 此法可应用于各类食品中蛋白质含量测定 凯氏定氮法：常量法、微量法及经改进后的改良凯氏定氮法 (1) ?原理 样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏，使氨蒸出，用硼酸吸收后再以标准盐酸或硫酸溶液滴定。根据标准酸消耗量可计算出蛋白质的含量。 凯氏定氮法 1、通过学习觊氏定氮法的原理，我们可知道操作分为哪几个大的步骤？ 2、加入硫酸钾、硫酸铜的作用是什么？ 消化反应方程式如下：2NH2(CH)2COOH＋13H2SO4 ＝(NH4)2SO4＋6CO2＋12SO2＋16H2O 浓硫酸具有脱水性:使有机物脱水后被炭化为碳、氢、氮。硫酸又具有氧化性:将有机物炭化后的碳化为二氧化碳，硫酸则被还原成二氧化硫 2H2SO4 ＋C ＝2SO2＋ 2H2O ＋CO2二氧化硫使氮还原为氨，本身则被氧化为三氧化硫，氨随之与硫酸作用生成硫酸铵留在酸性溶液中。  H2SO4＋2NH3 ＝ (NH4)2SO4 在消化完全的样品溶液中加入浓氢氧化钠使呈碱性，加热蒸馏，即可释放出氨气，反应方程式如下： 加热蒸馏所放出的氨，可用硼酸溶液进行吸收，待吸收完全后，再用盐酸标准溶液滴定，因硼酸呈微弱酸性（k＝5.8×10-10），用酸滴定不影响指示剂的变色反应，但它有吸收氨的作用，吸收及滴定的反应方程式如下： ② 蒸馏 ③ 吸收与滴定 2NaOH＋ (NH4)2SO4＝ 2NH3↓＋ Na2SO4 ＋ 2H2O 2NH3 + 4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O (NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3 (4)测定方法 ①??? 样品消化 （1）试样的制备与称样（称0.5-5g试样（含氮30-40mg） 放入凯氏烧瓶中） （2）消化 向凯氏烧瓶中依次加入硫酸铜0.4g、硫酸钾10g、硫酸20mL。将凯氏烧瓶放在电炉上，缓慢加热。待起泡停止，内容物均匀后，升高温度，保持液面微沸。当溶液呈蓝绿色透明时，继续加热0.5-1h。取下凯氏烧瓶冷却至约40℃，缓慢加人适量水，摇匀，冷却至室温。 观察与思考： 1、样品中加入浓硫酸后，溶液的颜色立即发生什么变化？ 2、消化过程中是否有大量的泡冲到瓶颈，原因是什么？ 3、瓶颈有什么颜色的有毒烟产生？ 4、如何判断消化的终点？ 改进后的消化装置 ②??? 蒸馏 　　　按图安装好微量定氮蒸馏装置。于水蒸气发生瓶内装水至2/3容积处，加甲基橙指示剂数滴及硫酸数毫升，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。 在接受瓶中加入10ml 40g/L硼酸及2滴混合指示剂，将冷凝管下端插入液面以下。 思考： 1、为什么在蒸汽发生瓶中要加入批示剂甲基橙和硫酸？ ２、加入数粒玻璃珠的作用是什么？ ③ 滴定：取下接受瓶，以0. 1mol/L盐酸标准溶液滴定至微红色为终点。 式中W—蛋白质的质量分数，%； V0—滴定空白蒸馏液消耗盐酸标准液体积，mL； V1—滴定样品蒸馏液消耗盐酸标准液体积，mL； V2—蒸馏时吸取样品稀释液体积，mL； C—盐酸标准液的浓度，mol/L； 0.014—氮的毫摩尔质量，g/mmol； F—蛋白质系数； m—样品质量，g。 (5) 结果计算： 2.3 样品的分解条件 （1）K2SO4或Na2SO4 ：提高溶液的沸点 (2)催化剂 ： CuSO4 ：Cu2SO4 ＋ 2H2SO4 → 2CuSO4 ＋ 2H2O ＋ SO2↑ 氧化汞和汞：良好的催化剂，但剧毒； （3）氧化剂：过氧化氢 硫酸钾的作用 加入硫酸钾可以提高溶液的沸点而加快有机物的分解，它与硫酸钾作用生成硫酸氢钾可提高反应温度其反应式如下： K2SO4+H2SO4=2KHSO4 2KHSO4=K2SO4+H2O↑+SO3 　　　一般纯硫酸的沸点在340℃左右，而添加硫酸钾后，可使温度提高到400℃以上，原因主要在于随着消化过程中硫酸不断地被分解，水分不断逸出而使硫酸钾浓度增大 ，故沸点升高。 　　　但硫酸钾加入量不能太大，否则消化体系