人脐带沃顿胶间充质干细胞研究及其在心血管组织工程中的应用现状.docVIP

PAGE PAGE 1 人脐带沃顿胶间充质干细胞研究及其在心血管组织工程中的应用现状 　　间充质干细胞（mesenchymalstemcells，MSCs）是干细胞家族的重要成员，来源于早期中胚层和外胚层的一类多能干细胞。MSCs最初在骨髓中发现，随后在多种组织中分离得到，包括肌肉、脂肪、大脑、软骨、牙髓以及脐带等[1]。大量研究表明，MSCs具有巨大的治疗潜力，因为其具有自我更新和多向分化的潜能，在体内或体外的合适条件下能分化成为多种成体细胞，从而实现组织重建；能够通过分泌可溶性因子和转分化等直接或间接刺激进行组织修复[2]。MSCs还具有免疫调节能力，体外扩增的MSCs具有免疫抑制功能，可通过与免疫细胞（如：T和B淋巴细胞、NK细胞及树突状细胞等）的相互作用来调节免疫反应，可能成为某些免疫性疾病（如：Crohns病）的治疗手段，对于减少造血干细胞及器官移植后的移植物抗宿主病（GVHD）的发生也有一定的作用[3]。另外，MSCs在连续传代和冷冻复苏后仍具有上述功能，可作为组织工程和细胞替代治疗的种子细胞[4]。 　　研究表明，围产期胚外组织中均含有MSCs，包括胎盘的各个部分、胎膜（羊膜和绒毛膜）和脐带，从脐带血和羊水中也能分离得到，这种MSCs是一种介于胚胎干细胞（embryonicstemcells，ESCs）和成体MSCs之间的干细胞类型，其生长发育关系与ESCs很接近，免疫原性较低，具有广泛的可塑性，而且比成体MSCs增殖得更快[5]。另外，用于分离细胞的胚外组织在分娩后通常会被丢弃，不会有伦理学方面的问题。脐带动静脉之间含有特殊的胚胎粘液样结缔组织—沃顿胶（Whanonsjelly），由沃顿胶分离得到的间充质干细胞即为人脐带沃顿胶间充质干细胞（WJ-MSCs）。这种来源广泛、再生能力强、有较强分化潜能、免疫原性低的干细胞，近年来引起人们的极大兴趣，特别是其对于再生能力非常有限的心血管组织的恢复与重建，研究者们进行了很多基础和临床研究，现将WJ-MSCs的研究进展及其在心血管组织工程中的应用综述如下： 　　1WJ-MSCs的来源 　　最初，人们从脐带血、羊水和胎膜获取细胞，用于围产期的一些诊断。20世纪80年代，开始应用围产期干细胞治疗白血病和代谢性疾病，1例患者应用HLA匹配的脐带血（来自患者的兄弟）治疗范科尼贫血获得成功[6]。从此以后，全世界成功实施了超过10000例脐带血移植术[7]。20世纪90年代，Langers和Vacanti兄弟提出了再生医学的概念[8]，之后不久，围产期胚外组织MSCs便被证明可以应用于组织工程。脐带是连接胎儿和胎盘的弹性索状结构，功能是保护其中的血管免受压迫、扭转和弯曲，同时也连接着胎儿和母体的血液循环。脐带包括两根脐动脉和一根脐静脉，它们镶嵌在一种富含蛋白多糖的特殊胶状基质-沃顿胶中，后者表面覆盖着羊膜上皮。沃顿胶是一种果冻样结缔组织，主要成分为Ⅰ和Ⅲ型胶原纤维，以及富含粘多糖的胶状细胞间质。胶原蛋白形成三维网状结构，与无定形的细胞间质呈松散的连接，细胞间质中则包含数种多聚糖，如：透明质酸等[9]。 　　早期研究表明，沃顿胶中含有一种成纤维细胞样、多能间充质干细胞群。这些细胞以前称为“脐带基质干细胞”，用来与分离自脐静脉的内皮细胞（HUVEC）和脐带血间充质干细胞（UCB-MSCs）相区别，之后则被称为“沃顿胶间充质干细胞”（WJ-MSCs）[10]。目前，WJ-MSCs可分别源自脐带的三个区域：即血管周围区、血管内区和亚羊膜区，各个区域分离得到的细胞在精细结构、免疫组化和体外功能方面的研究结果表明，三者无论是数量还是性质方面均有明显的差异，由此可推测这些区域的细胞来源可能并不相同。而来自脐带不同部分的成纤维样细胞是否来源和性质也不相同，目前仍不清楚。这些细胞表达相似的表面标志，提示其均为MSCs来源[11]。有研究表明，靠近羊膜表面的WJ-MSCs增殖能力更强，而靠近邻近脐静脉的WJ-MSCs则有更广泛的分化潜能[12]。 　　2WJ-MSCs的分离和培养 　　目前，分离WJ-MSCs主要的方法有组织块培养法和酶消化法[13]。先取15～20cm新鲜脐带，去除脐静脉和脐动脉，分离沃顿胶并切碎。组织培养法即是将组织碎块直接置于培养皿中培养，酶消化法则用蛋白酶（如胶原酶和透明质酸酶）将组织碎块消化后，用70～100um细胞筛过滤，再重悬于培养基中。酶消化法的优点是得到的细胞比较纯，可减少分离沃顿胶时其他细胞（如：红细胞和内皮细胞等）和组织碎片的污染风险[14]。新鲜分离的WJ-MSCs接种后0～3天处于潜伏期，细胞无明显增殖，第4天进入对数增长期，10～15天后进入平台期，此时通常呈成纤维细胞样。在平台期，细胞的倍增时间为60～85h，且基本保持稳定，到了生长晚期则呈进行性