彭文飒 13301050277.doc

学号 姓名 彭文飒 班级 13级临八1班 指导老师 李锦燕 【实验设计内容和要求】 已知： （1）A药物具有保护心肌细胞免受缺血损伤的作用； （2）心肌细胞缺血过程中B基因的表达产物B蛋白表达量会发生改变 试通过设计细胞生物学实验明确： （1）B基因的表达产物与心肌细胞缺血间的关系？ （2）在A药物保护心肌细胞免受缺血损伤过程中，B基因的表达产物是否参与其中？ 【背景资料】 心肌缺血是指心脏的血液灌注减少，导致心脏的供氧减少，心肌能量代谢不正常，不能支持心脏正常工作的一种病理状态。冠心病是引起心肌缺血最主要、最常见的病因。 随着人民生活水平的提高，目前心肌缺血在我国的患病率呈逐年上升的趋势。心肌缺血是中老年人的常见病和多发病。 【实验思路】 验证是B基因表达产物影响了心肌缺血，还是心肌缺血导致B蛋白表达量改变 （因已知心肌细胞缺血过程中B基因的表达产物B蛋白表达量会发生改变，故只需改变B基因表达，以此为变量，检测是否对心肌缺血有影响） 施以A药物进行对照实验，验证此过程中B基因表达产物的变化 （在实验一已证明B基因表达产物影响心肌缺血的基础上，进行实验二，检测A药物是否是通过改变B基因的表达，从而发挥作用。） 【相关技术介绍】 siRNA沉默基因 RNA干涉（RNAi）在实验室中是一种强大的实验工具，利用具有同源性的双链RNA（dsRNA）诱导序列特异的目标基因的沉寂，迅速阻断基因活性。siRNA在RNA沉默通路中起中心作用，是对特定信使RNA（mRNA）进行降解的指导要素。/link?url=gnqeQHGj4Km1hl5sSqqrp0UrD5hNH5Mc2wbD7mlniTlXj5bXrb0Cemnr61vikCdRMaMMFnfnqaidXp6Q0vI8_a /link?url=gnqeQHGj4Km1hl5sSqqrp0UrD5hNH5Mc2wbD7mlniTlXj5bXrb0Cemnr61vikCdRMaMMFnfnqaidXp6Q0vI8_a RT-PCR 反转录-聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR）将RNA的反转录和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合。首先提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用反转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板经行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。/link?url=8TAX_msu_2X6hWBLyqgr7i5iKppGVc1wswWU1ae961UQjPUd6P6Wj_zieK9Nt_ABb6P8b0NqzRCLa8pXAwWEG_ /link?url=8TAX_msu_2X6hWBLyqgr7i5iKppGVc1wswWU1ae961UQjPUd6P6Wj_zieK9Nt_ABb6P8b0NqzRCLa8pXAwWEG_ 免疫组化 抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学利用这一原理，先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。/link?url=Z9rip5FQeJ3TyxXMP7bwnG8QyB068xGtkEKRIMGEwQO7rAHzzAeK3QWNdFrzhPlzebQ0SkQwPYuG-0kXRSoKqK /link?url=Z9rip5FQeJ3TyxXMP7bwnG8QyB068xGtkEKRIMGEwQO7rAHzzAeK3QWNdFrzhPlzebQ0SkQwPYuG-0kXRSoKqK Western Blot 采用是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。/link?url=XBB9-jxDAkFaW9XBq1po3c8G1lZwhWPxv2rzmYp-StmRhA6PvVwvBb0X06Q4ZSiDnHnDut04c-BUSePYp8ENvK /link?url=XBB9-jxDAkFaW9XBq1po3c8G1