重组人VEGF165工程菌的发酵及表达产物的纯化与活性测定.PDF

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2019-08-02 发布于天津
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重组人VEGF165工程菌的发酵及表达产物的纯化与活性测定.PDF

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学报 82 Journal of China Pharmaceutical University 　200 , 35(1):82 ～ 85 VEGF165 1, 2 2 2 3 1 1 2 刘　煜 , 吴国祥 , 赵建阳 , 颜天华 , 奚　涛 , 沈子龙 , 成国祥 1 2 3 (, 210009;, 201203;, 210099) 【　】　:优化重组人VEGF (rhVEGF )工程菌的发酵条件, 分离纯化目的蛋白并检查活性。 165 165 :考察了甲醇诱导度和诱导时间对目的蛋白表达量的影响;发酵液经离心、透析后, 经肝素亲和柱层析、超滤制得纯品;采用CAM 实验和血管内皮细胞MTT 法测定生物活性, 比较了与人VEGF165标准品的免疫原性。 : 最佳表达条件为:甲醇诱导度为1%, 诱导时间为5 ～6 d;采用Heparin-Sepharose CL6B 亲和层析后, 产物纯度可达90%以上;活性测定结果显示, 目的蛋白具有促血管生成作用;与人VEGF 具有相似的免疫原性。 :经发 165 酵纯化后获得了有活性的重组人VEGF 纯品。 165 【】　血管内皮生长因子;巴氏毕赤酵母;肝素亲和层析;CAM;HMVECnd 增殖;免疫原性【】　　Q815　【】　A　　【】　1000-50 8(200 )01-0082-0 　　(vascular endothelial crowth trifuge 5 15D(eppendorf)。 factor, VEGF) 1.2　实验材料 , VEGF HMVECnd (Cascade BiologicsTM ); , VEGF M131 、(Cascade BiologicsTM , );MTT, ;(); [1-3] 。 G 18(SIGMA);VEGF (Santa Cruz , Biotechnology); , rhVEGF ();(BIO-RAD)。 165 , 。 2 　 1 　 2.1　表达条件的筛选 1.1　主要仪器 2.1.1　甲醇诱导度的选择　6 50 ml (Hitachi ); , , (Beckman );(Malaysia ); , 0.25%, 0.5%, 0.75%, (); 1.0%, 1.5%, 2.0%, 6 , (Sanyo);HZQ-X100 ,HZQ-F ELISA VEGF