细胞生物学 实验八 植物细胞骨架的光镜观察.ppt

实验八植物细胞骨架的光学显微镜观察 问 题 细胞骨架的化学成分是什么？ 如何显现细胞内的骨架结构？ 如何显现微丝？ 如何显现微管？ 如何显现中间纤维？ 细胞骨架的组成和分布 微管 中间纤维 微丝 微管 （微管蛋白） 微丝 （肌动蛋白） 中间纤维 （5种蛋白） 实验原理 用适当浓度的TritonX—100处理细胞，可抽提掉细胞质内结合在细胞器膜结构上的蛋白质，而仅保存骨架蛋白，使细胞质背景清晰。 经戊二醛固定，蛋白质的特异性染料考马斯亮蓝染色后，就可以观察到细胞质骨架的分布情况。 实验步骤 撕取洋葱鳞叶内表皮，约1cm2，置于小瓶中； 用磷酸缓冲液浸泡片刻； 1% TritonX—100处理20-30分钟； M—缓冲液洗3次，每次3分钟； 3%戊二醛固定15分钟； 用磷酸缓冲液洗3次，每次3分钟； 考马斯亮蓝染色15分钟； 蒸馏水洗2次； 置于载玻片上，盖上盖玻片，观察。 试 剂 M-缓冲液 咪唑（PH6.7） 络合剂调节离子浓度 MgCl2 离子强度和渗透压 KCl 离子强度和渗透压 EGTA 除去杂离子,维持pH EDTA 除去杂离子,维持pH 巯基乙醇 切断二硫键,维持还原