胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响实验设计.docVIP

胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响 【实验目的】 观察胰岛素和肾上腺素对家兔血糖浓度的影响。 掌握血糖浓度的测定方法。 掌握血糖浓度的正常参考值、了解血糖测定的临床意义。 【实验原理】 血清中的糖称为血糖，绝大多数情况下都是葡萄糖。体内各组织细胞活动所需的能量大部分来自葡萄糖，所以血糖必须保持一定的水平才能维持体内各器官和组织的需要。正常人在清晨 \t /_blank 空腹血糖浓度为80～120毫克/100ml。 使血糖浓度降低的激素：胰岛素 胰岛素对血糖的调节机制，首先是使肌肉和脂肪组织细胞膜对葡萄糖的通透性增加，利于血糖进入这些组织进行代谢。胰岛素还能诱导葡萄糖激酶、磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶的合成，医学教|育网搜集整理加速细胞内葡萄糖的分解利用。胰岛素通过使细胞内cAMP含量减少，激活糖原合成酶和丙酮酸脱氢酶系，抑制磷酸化酶和糖异生关键酶等，使糖原合成增加，糖的氧化利用、糖转变为脂肪的反应增加，血糖去路增快；使糖原分解和糖异生减少或受抑制，使血糖来源减少，最终使血糖浓度降低。 使血糖浓度升高的激素：肾上腺素 肾上腺素的作用机制是通过肝和肌肉的细胞膜受体、cAMP、蛋白激酶级联激活磷酸化酶,加速糖原分解,使血糖升高.在肝脏,糖原分解为葡萄糖,在肌肉,则经糖酵解途径生成乳酸,并通过乳酸循环间接升高血糖水平.主要在应急情况下发挥调节作用.是强有力升高血糖的激素。 邻苯甲胺法：本实验采用邻甲苯胺法测定血糖，其原理是葡萄糖在酸性介质中加热脱水反应生成5－羟甲基－2－呋喃甲醛，分子中的醛基与邻甲苯胺缩合成青色的薛夫氏碱，通过比色可以定量 【实验试剂】 肝素抗凝剂、凡士林、二甲苯、抗凝剂、胰岛素、0.1%肾上腺素液、邻苯甲胺试剂、蒸馏水、葡萄糖标准液 【实验操作】 1.动物准备及采血 取空试管4支，编号1,2,3,4，分别加入肝素抗凝剂0.01ml。取空腹16小时以上的家兔两只，分别编号1,2，称体重并记录。 用耳静脉采血法:先剪去兔儿静脉的毛，再用二甲苯擦拭兔耳部静脉，使其充血，在其周围抹上凡士林防止血液污染，用刀片轻轻挑破边缘耳静脉，放血入含抗凝剂的试管1和2，约需2ml至3ml，边滴边摇，以防凝固，取血完毕，用干棉球压迫血管止血。 2.注射激素并采血 1号兔臀部皮下注射胰岛素，一小时后于心脏取血到抗凝管3，测定血糖，将2号兔臀部皮下注射0.1%肾上腺素液，剂量为每公斤体重0.4ml，观察兔子情况。30mins后，心脏取血入抗凝管4中。心脏采血法：将注射器肝素化后，置家兔于仰卧位，固定四肢，在左侧胸壁3至4肋间，摸到心搏最明显处，垂直进针，深度约3cm，当有落空感时，可感觉针尖随心搏而动，固定针头，采血8ml左右，放入抗凝管中。 3.测定注射前后的血糖 将收集的4管血液离心10mins，取上层血浆，分别制成胰岛素前1，胰岛素后2，肾上腺素前1，肾上腺后2。取干燥的试管6支，编号并按表操作，混匀，放入沸水浴15mins，冷却，用波长630nm进行分光测定，读取吸光度值，并按下列公式计算葡糖含量。 葡萄糖mg/100ml 血浆=测定管吸光度/标准管吸光X100% 试剂/ml 测管1 测管2 测管3 测管4 标准管 空白管 血清 0.1 0.1 0.1 0.1 X X 葡萄糖标准液 X X X X 0.1 X 蒸馏水 X X X X X 0.1 邻苯甲胺试剂 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 【注意事项】 （1）离心机的使用 （2）微量移液器的使用 （3）取血时的注意事项 （4）注射器，刀片的使用 （5）注射器的肝素化 （6）心脏取血的进针位置，深度和技巧 （7）不要将空气注入动物体内 （8）血液放入试管中要先将注射器的针头取下，以防溶血。 （9）邻甲苯胺具有毒液和腐蚀性，慎用。 【临床意义】 血糖升高：病理性主要见于糖尿病，其他内分泌疾病如肾上腺皮质机能亢进，垂体前叶机能亢进等。 血糖降低：病理性如胰岛细胞瘤，胰岛素分泌过多，过量胰岛素治疗，肾上腺皮质功能减退等。