第三小组受激发射损耗荧光显微术.pptx

;STED（受激发射损耗荧光显微术）;;基本原理;激发光;STED的原理涉及激光的非线性抑制机制。类似BOSE降噪耳机，STED也是主动发射一 环形的“抑制激光”(相位和激发激光差180 度)，把本来存在在四周的荧光信号强行拉回到基态，但不产生光子。这样一来，本来一个很大的光斑就剩下中心区域一个50‐60nm的光斑，已经大大突破了衍射极限。Stefan Hell第一次 实现了超高分辨的光学显微技术。 STED缺点：耗损光需要很强的亮度，激光器造价昂贵，对样品损伤较大，操作起来相当繁琐， 一次只能看一块很小很小的区域，效率低。远不如现在用的PALM或STORM。;注意事项及缺点;SSIM：Saturated Structured Illumination Microscopy， 饱和结构光照明显微镜;SSIM 改变光学的点扩散函数来突破光学极限的另一个方法是利用饱和结构照明显微技术(saturatedstructureilluminationmicroscopy,SSIM) SSIM技术的原理是将多重相互衍射的光束照射到样本上，然后从收集到的发射光模式中提取高分辨率的信息. ;莫尔条纹是一种常见的光学现象，只要把周期性 的条状图案重叠就可以观察到。 莫尔条纹是18世纪法国研究人员莫尔先生首先发现的一种光学现象。从技术角度上讲，莫尔条纹是两条线或两个物体之间以恒定的角度和频率发生干涉的视觉结果，当人眼无法分辨这两条线或两个物体时，只能看到干涉的花纹，这种光学现象中的花纹就是莫尔条纹。 莫尔条纹能从三个方面产生： 1. 双色或多色网点之间的干涉； 2. 各色网点与丝网网丝之间的干涉； 3. 作为附加的因素，由于承印物体本身的特性而发生的干涉。使用莫尔条纹防护系统的目的就在于根据你选定的丝网目数、加网线数、印刷色数和加网角度来预测莫尔条纹。 ;;如果知道b的结构及a+b所叠加的莫尔条纹c，将不能探测的高频转 化为能探测的低频，就能够反推出a所携带的精细结构信息。 即使a、b图逐渐缩小， 里面的高频条纹已经不可见了，但是在c中的莫尔条纹仍可以清楚地分辨，这就是 SIM的精义。;;单分子荧光定位超分辨显微成像技术;荧光显微成像的极限;光斑大小;对比度; 通过重复扫描目标样本，并在每次拍摄时只让少量分子发光，最后把 所得???像重迭在 起 得到突破“衍射极限 的高分辨率 微影像 所得图像重迭在一起，得到突破“衍射极限”的高分辨率显微影像。 Eric Betzig —— PALM Betzig 庄小威 —— STORM 2006年，超高分辨率显微镜研究翻开了新的篇章。Eric Betzig、 庄晓威科研小组几乎同时报道了他们提高显微镜分辨率 的科研成果。贝齐格(Betzig)的PALM技术与庄小威的STORM技术虽然叫法不同，但都是利用 了荧光分子的可调控性原理 ,论文也是在2006年差不多的时间发表 。;PALM;PALM;PALM的不足;STORM基本原理 传统成像由于分子同时受激发，同时发光，导致艾里斑互相重合，无法分辨单个分子。 STORM成像，每次样品中仅有少量随机、离散的单个荧光分子发光。由于距离较远， 艾里斑不会互相重合 通过标记中心可以识别单个荧光分子；通过拟合，找出每个荧 光分子中心点的位置。重复拍摄多张照片之后，就可以把所有荧光分子的中心点位置 叠加起来形成整幅图像。;STORM的优势;STORM的不足;Near-Field Scanning Optical Microscopy (NSOM);The Original Idea of NSOM;Comparison of far-field and near-field imaging of a sample;;Basic Concept of NSOM;;The Greatest Advantage of NSOM;The Disadvantages of NSOM;Problems Restricting the Use of NSOM in Biology;References