遗传变异和DNA重组.ppt

鸡的β肌球蛋白免疫检出，目的是检测所插入的外源基因序列是否能表达正确的蛋白质 目 录 重组DNA技术操作的主要步骤 载体 质粒 噬菌体 病毒 目的基因（外源基因） 基因组DNA cDNA 人工合成 PCR产物 限制酶消化 开环载体DNA 目的基因 连接酶 重组体 转化 体外包装，转染 带重组体的宿主 筛选 表型筛选 酶切电泳鉴定 菌落原位杂交 目 录 重组DNA技术操作过程可形象归纳为 小 结 分 分离目的基因 切 限制酶切目的基因与载体 接 拼接重组体 转 转入受体菌 筛 筛选重组体 建立表达体系的基本步骤 表达载体的构建 受体细胞的建立 表达产物的分离纯化 （六）克隆基因蛋白质的表达 1. 原核表达体系 （E.coli表达体系最为常用） 载体选择： 选择标志 强启动子 翻译调控序列 多接头克隆位点 E.coli表达体系的不足 不宜表达真核基因组DNA 不能加工表达的真核蛋白质 表达的蛋白质常形成不溶性包涵体 (inclusion body) 很难表达大量可溶性蛋白 大鼠胰岛素原cDNA 的表达和分泌 目 录 优点：可表达克隆的cDNA及真核基因组DNA 可适当修饰表达的蛋白质 表达产物分区域积累 缺点：操作技术难、费时、经济 转染：将表达载体导入真核细胞的过程 方法：