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丙型肝炎病毒（HCV）检验技术进展探究 【中图分类号】R446. 11【文献标识码】A【文章编号】 1672-3783 （2012） 12-0499-02 【摘要】：防控丙型肝炎传染源及阻断传播途径最为有 效的手段就是早期准确诊断并及时发现HCV感染者。从传染 源和传播途径两方面控制丙型肝炎[1],笔者将对丙型肝炎 病毒临床检验技术进展研究。 【关键词】HCV抗原检测核心抗原核酸检测技术（NAT） 同时检测 自1989年建立了丙肝病毒抗-HCV检测方法以来，随着 医学检测技术和仪器的不断发展，丙型肝炎的检测技术一直 处于不断发展中。到目前为止，丙型肝炎检测技术主要有抗 -HCV检测、HCV-RNA核酸扩增检测、HCV核心抗原的检测以 及同时检测抗-HCV和HCV核心抗原4种类型。笔者将对丙型 肝炎临床检验技术进展研究如下。 1抗-HCV的检测 最早出现的HCV检测技术是抗-HCV的检测。由于HCV在 病人外周血液中的含量及病毒抗原的含量很低，这就使得用 常规方法难以直接检测，经过十几年的不断改进和发展，其 检测方法又演变出多种，如：双抗原夹心ELISA、间接酶联 免疫吸附实验（间接ELISA）、重组免疫印迹法（RIEA）、蛋 白芯片检测法以及免疫层析法。在这些方法之中，重组免疫 印迹法（RIBA）是抗体检测的金标准，蛋白芯片检测法主要 用于抗-HCV的分型。而ELISA由于其操作简单，检测设备廉 价，因此成为应用最广的抗体检测技术。 根据出现时间的先后以及使用抗原的不同，抗-HCV检测 技术可分成三代。第一代抗-HCVIgG试剂盒所用的抗原来自 病毒基因组非结构区（C100）,它的使用使HCV的输血感染 率下降了 80%以上。但其缺陷是：灵敏度较低，抗体检出时 间较晚，敏感性也较高，达到80%?90%,但假阳性较高。第 二代试剂除了包被C100抗原外又加入了 HCV核心区多肽 C22—3和非结构区抗原C33CO抗-C22-3和抗-C33C感染后 出现较早，敏感性和特异性明显提高，感染后8?12周即可 检测。且对HCV的特异性较好，二者联合应用可进一步提高 检出率。第三代HCV抗体ELISA试剂中采用了重组的NSS多 肽，核心区抗原比例相对下降，而相应地增加了非结构区的 NSS区C33C抗原的比例，添加了 NSS区抗原使其敏感性和特 异性得到进一步改善。 2HCV-RNA核酸扩增检测技术 从外周血中检出HCVRNA是HCV复制活跃的可靠指标， 在感染2个星期内的血清中可检测到HCVRNA,在感染自然恢 复前血清中HCVRNA将达到一个高峰，目前NAT检测被国内 外部分机构作为HCV感染的确认方法。但HCVRNA在达到峰 值或重新出现前数天或数周内偶尔也可能检测不到［2］。同 时HCVRNA还受进食的影响，易与血中脂质及脂蛋白结合， 降低检出率。因此在一定程度上影响了 NAT检测方法的完美。 另外由于NAT检测技术本身在技术和设备上要求较高，且耗 时、实验步骤较多（其中任何步骤出现问题均影响其检出）, 因此该方法也容易因污染而出现假阳性，难以在常规工作或 基层实验室推广，限制了其应用的普遍性。 NAT检测技术同为检测HCVRNA,但不同的厂商发展出不 同的方法和技术，其中PCR技术发展得最为迅速，也得到了 最广泛的应用，最早的是RT-PCR,然后是套式PCR,现在是 实时荧光定量PCR,检测灵敏度特异性不断提高，且实现了 全自动定量检测。最新的NAT研究有环介导等温基因扩增技 术（LAMP）以及基因芯片技术［3, 4］,由于LAMP技术操作 简单，且无需特殊仪器，具有广阔的应用前景。 3HCV抗原的检测 近年来对HCV抗原的检测方法的研究不断取得进展，关 键点在于单克隆抗体的研制以及抗原抗体复合物解离剂的 研究。近期美国Ortho公司已推出了用双抗体夹心法定性或 定量检测血清样品中总的或游离的HCV核心抗原ELISA试剂 盒，与RT-PCR方法相比，具有操作简单、耗时短、对实验 环境要求较低以及假阳性率低等特点，在临床上可用于HCV 血清学转换前的早期急性丙型肝炎诊断、抗-HCV阳性感染者 的病毒血症分析以及HCV感染者治疗前后病毒血症追踪分析 等。HCV核心抗原存在的时间较短（约27?70d）,所以HCV 核心抗原的检测还要结合抗-HCV的结果。同时HCV核心区基 因的变异也可能影响了 HCV核心抗原的检测，比如HCV核心 区49位氨基酸的突变就降低了抗原测定的敏感性。改进现 行试剂盒的主要途径是提高单克隆抗体对于天然抗原的构 象表位的亲和力。 对于非结构蛋白的检测主要为NS3、NS4和NS5位点的 蛋白，由于这部分蛋白出现变异的概率较大，目前仅见报道。 4同时检测抗-HCV和HCV核心抗原 联合检测抗原抗体的思路是HCV筛查