药用植物DNA标记辅助育种 一 三七抗病品种选育研究.docVIP

药用植物DNA标记辅助育种（一）：三七抗病品种选育研究 ［摘要］药用植物DNA标记辅助育种以DNA多态性为基础，依据分子 杂交、聚合酶链式反应、高通量测序等技术，筛选与高产、优质、抗逆等 表型关联的DNA片段作为标记，辅助新品种的选育。该研究采用DNA标记 辅助育种结合系统选育的技术，选育首个三七抗病新品种“苗乡抗七1号”。 结果表明，基于RADSeq技术检测出抗病品种包含12个特异S7P位点，经 验证record_519688位点与三七抗根腐病相关，包含此位点的基因片段可 作为抗病品种的遗传标记辅助三七系统选育；与常规栽培种相比，抗病品 种种苗根腐病及锈腐病的发病率分别下降836%, 718%；二年牛及三年牛三 七根腐病的发病率分别下降436%, 629%O此外，依据与抗病关联的SNP筛 选三七潜在的抗病群体，该模式扩大目标群体并提高选育效率。药用植物 DNA标记辅助育种将加快药用植物新品种选育及推广的进程，保障中药材 产业健康发展。 ［关键词］药用植物；DNA标记辅助育种；三七；连作障碍；抗病 品种；简化基因组测序技术；单核甘酸多态性 药用植物传统育种主要依赖于植物的表型选择，一个优良品种的培育 往往需要花费几年甚至十几年的时间，如何提高育种效率，是育种的关键。 基因型与环境间互作等多重因素会影响表型选择效率，现代分子牛物技术 可加快药用植物育种进程，而且缩短育种周期，其中药用植物DNA标记辅 助育种以DNA多态性为基础，依据分子杂交、聚合酶链式反应、高通量测 序等技术，筛选与高产、优质、抗逆等表型相联的DNA片段作为标记，辅 助新品种的选育，该技术可应用于遗传图谱构建、重要农艺性状基因的标 记定位、种质资源遗传多样性、分子标记辅助选择等方面。随着测序成本 的降低，已经陆续在屮草药开展了转录组、全基因组测序，这些序列信息 提供了大量的SSR和SNP等分子标记，有利于高密度遗传图谱和物理图谱 的构建，高密度图谱加速了分子标记与优良性状之间的连锁研究，为发掘 植物抗逆及参与有效成分合成途径的新基因提供了许多线索和启示，提高 了选育的效率。陈士林等首次提出“Ilerbgenomics”的概念，该学科涉及 屮草药结构基因组、功能基因组、基因组辅助育种、屮草药蛋白质组学、 中草药宏基因等内容，并阐明本草基因组学将加速药用植物优良品种的选 育并促进绿色中药农业的科学化和规模化发展［12］。 本文以三七Panax notoginseng (Burk) FH Chen为例，介绍了药用 植物依据DNA多态性为基础，利用高通量测序技术筛选与抗病相关联的SNP 标记，辅助三七抗病新品种的选育。三七是五加科人参属植物，其性温、 味甘、微苦，具有散瘀止血、消肿定痛的功能，是片仔廣、云南白药、复 方三七口服液等常见中药制剂的主要原料之一［3］。三七在心脑血管方面 的独特疗效越来越被人们所认可，其需求量逐年增加。为满足H益增长的 需求，三七已经开展了系统的栽培技术研究，形成了较为规范的GAP技术 体系［4］。然而三七为典型的生态脆弱型阴生植物，其分布区域较窄，连 作障碍等问题严重［56］。三七的人工栽培过程中病虫害比较严重，例如根 结线虫病害显著抑制了三七块根的生长，抑制率高达30%以上［7］；三七种植导致根际土壤微牛物多样性及组成的变化，随着其种植年限增加根腐病 致病菌Fusarum oxysporum的半度显著增加［8］。在病害防治过程中，高 毒农药的投入破坏了三七田间生态系统，并造成三七农残及重金属超标。 而三七不同栽培品种的抗病性存在显著性差异，选育抗病性品种可获得性 状优良、抗逆性强的三七群体植株，有效的减少农药的使用量［911］ o抗 病新甜种的选育是保障三七产业可持续发展的策略之一。 系统选育是三七遗传改良的方式之一，也是三七育种的重要手段。?0 玉琴等对三七植株性状差异进行比较，结果表明三七植株的茎、块根、休 眠芽、花序、叶、果实存在明显变异，为三七育种工作提供了依据［12］ o 通过对三七不同变异类型中皂昔含量的比较分析，确定将紫根、复叶柄平 展型、长形根、宽叶4种类型作为三七甜种选育的目标［13］。然而系统选 育育种周期长，受环境影响较大，在短时间内选择优良性状难度极大。采 用DNA标记辅助三七新品种的选育，该方法不仅准确性高，而且缩短育种 周期。本研究利用高通量测序技术检测抗病群体中的SNP位点，结合PCR 技术筛选与三七抗病关联的DNA片段，以此基因片段作为标记辅助系统选 育，并利用该关联基因片段筛选潜在的抗病群体。该模式可加快新品种选 育及推广的进程，为中药材可持续发展提供思路及策略。 1材料与方法 11三七DNA标记辅助新品种选育流程从文山周边收集抗病单株并播种 于云南文山三七科技示范园的试验田，该试验田为三七连作5年病