第四章高效液相色谱.pptVIP

* * 液相色谱法固定相 二、液－固吸附色谱法固定相　 　　 采用的吸附剂有硅胶、氧化铝、分子筛、聚酰胺等，仍可分为全多孔性和薄壳型两种，其特点如前所述。 三、离子交换色谱法固定相　 薄膜型离子交换树脂: 即以薄壳玻璃珠为担体，在它的表面涂约 1% 的离子交换树脂而成。 2. 离子交换键合固定相: 用化学反应将离子交换基团键合在惰性担体表面。 * 液相色谱法固定相 四、排阻色谱法固定相 1. 软质凝胶：如交联葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶等，适用于水为流动相，在常压下使用。 2. 半硬质凝胶：如苯乙烯－二乙烯基苯交联共聚凝胶（交联聚苯乙烯凝胶），是应用最多的有机凝胶，适用于非极性有机溶剂。 3. 硬质凝胶：如多孔硅胶、多孔玻璃珠等，多孔硅胶是用得较多的无机凝胶。 化学稳定性、热稳定性好、机械强度大，流动相性质影响小，可在较高流速下使用。 由于高效液相色谱中流动相是液体，它对组分有亲和力，并参与固定相对组分的竞争。因此，正确选择流动相直接影响组分的分离度。对流动相溶剂的要求是： 1.化学惰性，不与固定相和被分离组分发生化学反应，保证柱的稳定性和分离的重现性。 2.适用的物理性质，包括沸点较低，以便于分离组分和溶剂回收;低粘度，利于提高传质速率和分离速度、降低柱前压;弱或无紫外吸收等，以降低UV检测器本低响应，提高检测灵敏度;对样品具有适当溶解能力等。 3.溶剂清洗和更换方便，毒性小、纯度高、价廉等，便于操作和安全。 第五节 液相色谱法流动相 选择流动相时应注意下列几个因素： 流动相纯度：防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。　 (2) 避免流动相与固定相和被分离组分发生化学反应，而使柱效下降或损坏柱子：如在液-液色谱中，流动相应与固定液互不相容，否则，会使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。保证柱的稳定性和分离的重现性。 (3) 对试样要有适宜的溶解度：试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。 (4) 溶剂的粘度小些为好：否则，会降低试样组分的扩散系数，造成传质速率缓慢，柱效下降。 (5) 应与检测器相匹配：例如，当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。 （6）溶剂清洗和更换方便，毒性小、纯度高、价廉等，便于操作和安全。 在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。 例如，采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 异丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小) 有时还需要选用二元或多元溶剂，以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。选择时要参阅有关手册，并通过实验确定。 * 1.高压输液泵 HPLC使用的高压泵应满足下列条件： a. 流量恒定，无脉动，并有较大的调节范围（一般为1~10 mL/min）； b. 能抗溶剂腐蚀； c. 有较高的输液压力；对一般分离，60×105Pa的压力就满足了，对高效分离，要求达到150~300×105Pa。 (1) 往复式柱塞泵 第六节 高效液相色谱仪 * 高效液相色谱仪 (2) 气动放大泵 * 高效液相色谱仪 2. 梯度淋洗装置 梯度洗提，就是载液中含有两种（或更多）不同极性的溶剂，在分离过程中按一定的程序连续改变载液中溶剂的配比和极性，通过载液中极性的变化来改变被分离组分的分离因素，以提高分离效果。 梯度洗提可以分为两种： a. 低压梯度（也叫外梯度）：在常压下，预先按一定程序将两种或多种不同极性的溶剂混合后，再用一台高压泵输入色谱柱。 * 梯度淋洗装置 b.高压梯度 ( 或称内梯度系统 ) ：利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按按设定的比例送入梯度混合室，混合后，进入色谱柱。 * 高效液相色谱仪 3. 进样装置 (1).注射器进样装置：进样所用微量注射器及进样方式与 GC法一样。进样压力150×105Pa，当进样压力150×105Pa时，必须采用停流进样。 (2).高压定量进样阀： 与GC法用的流通法相似，能在高压下进样。其结构如图所示： * 4. 高效分离柱 色谱柱是液相色谱的心脏部件，它包括柱管与固定相两部分。柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、铜及内衬光滑的聚合材料的其他金属。玻璃管耐压有限，故金属管用得较多。常用的标准柱型是内径为 4.6 或 3.9mm ，长度为 1