知识点练习微生物的实验室培养.docxVIP

微牛物的实验室培养（5年15考） （2013新课标全国II卷、四川理综、江苏卷，北京卷、浙江、山东，天津） 一、培养基 1概念：按照微生物对营养物质的不同需求,配制出的供其生长繁殖的营养基质 _ J（l）一般都含有生、、无机盐、碳源、氮源 2?宫养构成［⑵还需满足不同微生物对pH、特殊营养物质以及O?的要求 3.培养基的种类及用途 划分 标准 培养基 的种类 特点 用途 物理 性质 液体培养基 不加凝固剂 工业生产 半固体培养基 加凝固剂，如琼脂 观察微生物的运动、鉴定 固体培养基 微生物的分离与鉴定、活菌计数、 菌种保藏 化学 成分 天然培养基 成分不明确的天然物质 工业生产 合成培养基 培养基成分明确 分类、鉴定 用途 选择培养基 培养基中加入某种化学物 质，以抑制不需要的微生物 的生长，促进所需要的微生 物的生长 培养、分离出特定微生物（如在培养 酵母菌和霉菌时，可在培养基中加 入青霉素；在培养金黄色葡萄球菌 时，可在培养基屮加入髙浓度的食 盐等） 鉴别培养基 根据微生物的代谢特点，在 培养基中加入某种指示剂 或化学药品 鉴别不同种类的微生物，如可用址 红—美蓝培养基检测饮用水或乳制 品屮是否有大肠杆菌（若有，菌落呈 深紫色，并带有金属光泽） 特别提醒 自养微生物与异养微生物所需的营养物质不同： 自养微生物所需的碳源、氮源来自含碳、含氮的无机物，而异养微生物需要的碳源、氮源来自含碳、含 氮的有机物，因此可根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。②含氮无机物不但能给自养微生物提 供氮源，也能作为能源物质，提供能量，如NH3既作为硝化细菌的氮源也作为能源。 二、无菌技术 特点：使用较为軽的物理或化学方法仅杀死 1 .消毒 物体表面或内部的部分微生物（不包扌舌芽范和抱子） .常用方法：煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法 特点：指使用强烈的理化因素杀死物体内外 2.灭菌，所有微生物（包括芽抱和砲子） I常用方法：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌 3?消毒和灭菌比较 比较 理化因素的作用强度 消灭微生物的数量 芽砲和砲子能否被消灭 消毒 较为温和 部分生活状态的微生物 不能 灭菌 强烈 全部微生物 三、微生物的纯化培养及菌种的保藏 1原理:在培养基上将细菌稀释或分散成里个细胞，使其长成单个菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。 制备固体培养基的流程计算—称量一溶化一灭菌—倒平板 3.纯化大肠杆菌的方法 常用的微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。 （1）平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培 养基的表面。（如下图示） 几种划钱方法示意图 （2）稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培 养基的表面，进行培养。（如下图所示） 稀释液稀释液稀释液稀释液稀释液稀释液①系列稀释操作（如下图所示）lmL ImL ImL ImL ImL ImL（3）两种纯化细菌的方法的比较涂布平板操作（如卜?图所示） 稀释液稀释液稀释液稀释液稀释液稀释液 ①系列稀释操作（如下图所示） lmL ImL ImL ImL ImL ImL （3）两种纯化细菌的方法的比较 .一~涂布器議巨琴厂 2 ?取少fit菌液（不《 置 超过O.lmL）,滴加W 一 4 ?用涂布器将 cs 4 ?用涂布器将 cs“占菌液均匀地涂 3?将沾有少虫酒梢布在培养基表 的涂布器在火焰上面°涂布吋町 引燃，待酒精燃尽转动培*|肚， 后，冷却8-10 s 使涂布均匀 1 ?将涂布器 浸在盛有酒 精的烧林中 项目 优点 缺点 适用范围 平板划 线法 可以观察菌落特征，对混 合菌进行分离 不能计数 适用于好氧菌 稀释涂 布平板 法 可以计数,可以观察菌落 特征 吸收量较少，较麻烦，平 板不干燥效果不好，容易 蔓延 适用于厌氧菌和兼性厌氧 菌 4?培养：接种后的培养皿放入恒温箱内培养 5.菌种保藏⑴临时保藏 操作：采用固体斜血培养基,菌落长成后,放入4 °C冰箱中保藏,以后每3?6个月, 转移一次新的培养基 缺点：保存时间不长,菌种易被污染或 、产生变异 ⑵长期保存法：廿油管藏法,放在一20]C下保存 特别提醒(1)配制牛肉膏蛋白月东固体培养基的注意事项 倒平板的适宜温度是50 °C左右，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。 平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 平板划线操作的注意事项 第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环。 灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。 划线时最后一区不要与第一区相连。 划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。 环节高考例证明确考向 环节 高考例证明确考向 》例证一 微生物培