高考生物总复习 第一部分 非选择题必考五大专题 专题五 选修部分 第15讲 基因工程及克隆技术名师课件.pptVIP

(2)形成重组DNA分子 ①通常是用相同的限制性核酸内切酶分别切割目的基因和载体DNA，形成相同粘性末端，然后用DNA连接酶将目的基因和载体DNA连接形成重组DNA分子(如下图)。但在实际操作中，可形成3种不同的连接物：目的基因—载体连接物、载体—载体连接物、目的基因—目的基因连接物。 ②因为同种限制性核酸内切酶切割目的基因和载体DNA所得粘性末端全部相同，在DNA连接酶的作用下，目的基因和载体DNA则可任意连接。为了使目的基因与质粒能定向连接，可使用两种不同的限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒(如下图)。 (3)将重组DNA分子导入受体细胞 受体细胞 植物细胞 动物细胞或原生质体 微生物 常用方法 农杆菌转化法 显微注射技术 CaCl2处理法 转化过程 目的基因插入Ti质粒的T－DNA上→导入农杆菌→侵染植物细胞→目的基因稳定维持和表达 将重组DNA分子提纯→显微注射入受体细胞→培养、发育→获得具有新性状的生物 CaCl2处理增大细胞壁通透性→重组DNA分子与处理后的受体细胞混合→重组DNA分子进入受体细胞 (4)筛选含有目的基因的受体细胞 ①筛选原因：并不是所有的细胞都接纳了重组DNA分子，还有部分细胞接纳了载体—载体连接物、目的基因—目的基因连接物，甚至有的细胞既没有接纳重组DNA分子，也没有接纳载体—载体连接物、目的基因—目的基因连接物。 ②筛选方法：主要是利用载体上的抗生素抗性基因的作用借助一定方法(如影印接种)用选择培养基筛选。 (5)目的基因的表达 若目的基因成功表达，则转基因生物细胞中会产生相应的蛋白质(可用抗原—抗体法检测)，转基因生物会表现相应的性状(如可接种病原体观察转基因生物的抗性)。 考点3　结合植物的克隆考查科学实践能力 5.下面是关于植物克隆的问题。请回答： (1)为培育能高效吸收和富集重金属镉的转基因植物，将野外采得的某植物幼叶消毒后，用酶混合液处理，获得了原生质体。酶混合液中含有适宜浓度的甘露醇，其作用是____________。 (2)将目的基因导入到原生质体，经培养形成愈伤组织，再通过________得到分散的胚性细胞，发育成________，生长发育后获得转基因植株。 (3)愈伤组织继代次数过多会丧失细胞全能性的表达能力，下列原因错误的是________。 A.愈伤组织发生染色体畸变 B.愈伤组织不能分散成单细胞 C.愈伤组织中激素平衡发生改变 D.愈伤组织对外源激素敏感性发生改变 解析　(1)甘露醇可以维持溶液的渗透压，以防止失去细胞壁的原生质体吸水胀破。 (2)将愈伤组织放在摇床上，通过液体悬浮培养可以得到分散的单细胞，这些单细胞具有细胞质丰富、液泡小、细胞核大等胚性细胞的特征，胚性细胞发育成胚状体，进一步形成植株。(3)在长期的培养过程中，愈伤组织可能发生染色体畸变、内部激素平衡改变、对外源激素敏感性改变等变化，而丧失细胞全能性的表达能力。 答案　(1)维持渗透压　(2)液体悬浮培养　胚状体　(3)B 6.植物叶肉细胞原生质体的分离和培养的主要过程可用下图所示图解简单表示，请据图回答下列问题： (1)培育胚状体利用了________这一项生物技术，胚状体再继续培养，则可培育出完整的植株，这体现了植物细胞的________。 (2)要获得植物叶肉细胞的原生质体，需要在________溶液环境下，用________酶和________酶去除细胞壁。 (3)培养基中除了含有一定的营养外，还必须含有________等植物激素，还需要对培养基进行严格的________。 (4)如果愈伤组织是三七叶肉细胞培养产生的，为了获得三七的次生代谢产物，则只需要培养到________。如果愈伤组织是棉花叶肉细胞培养产生的，通过基因工程要获取抗虫棉，重组DNA分子导入棉花愈伤组织细胞常用的方法是________法。 (5)从叶片的叶肉细胞到获得胚状体的过程中，必须要经过________(不定项选择：A.有丝分裂　B.减数分裂　C.原生质体融合　D.脱分化　E.再分化)。 解析　(1)离体植物细胞通过脱分化形成愈伤组织，通过再分化形成具有根和芽的胚状体，再通过细胞分裂、分化发育成一个完整的植株。该技术称为植物组织培养，其原理为植物细胞的全能性。(2)制备叶片原生质体的酶混合液中，一般含较高浓度的甘露醇，其目的是避免制备的原生质体吸水胀破；根据酶的专一性，去除植物细胞壁需用纤维素酶和果胶酶。(3)培养基的成分包括水、无机盐、维生素、氨基酸、蔗糖、植物激素(生长素和细胞分裂素等)等；培养基要求进行严格的灭菌。(4)三七的细胞产物为细胞的代谢产物，将三七叶肉细胞培养到愈伤组织即可；目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法。(5)离体叶肉细胞培养到胚状体的过程中必须经过脱分化和有丝分裂形成愈伤