乳与乳制品非常规理化指标检验维生素C的检测.doc

乳与乳制品非常规理化指标检验维生素C的检测 YLNB 5.4 1．依据 GB/T 5413.18—1997 2．范围 本方法规定了用荧光法测定维生素C的方法。 本方法适用于婴幼儿配方食品和乳粉中维生素C的测定。 3． 方法提要 抗坏血酸（维生素C）在活性炭存在下可氧化成脱氢抗坏血酸，它与邻苯二胺反应生成一荧光团，该荧光团在约350nm处有最大激发波长，而在约430nm处荧光最强，荧光强度与浓度成正比。 加入邻苯二胺以前，使抗坏血酸形成HBO3-脱氢抗坏血酸络合物，可阻止其形成荧光产物，任何残留的荧光均由外来物引起，可将它们作为“空白”。 比较经相同氧化处理的样品和标样的荧光强度可计算出抗坏血酸的含量。 4． 试剂、菌种和培养基 所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。 4．1 高峰氏淀粉酶（Taka-Disatase）。 4．2 偏磷酸-乙酸溶液：称取15g偏磷酸及40mL乙酸于200mL水中，溶解后稀释至500mL备用。 4．3 酸性活性炭：称取200g活性炭（化学纯），加入1L体积为1：9的盐酸，加热至沸腾，真空过滤，取下结块于一个大烧杯中，加入1L水，搅拌过滤后，再用水清洗一次，在110～120℃烘箱中干燥过夜后使用。 4．4 乙酸钠溶液：用水溶解500g三水乙酸钠，并稀释至1L。 4．5 硼酸-乙酸钠：称取3g硼酸，用乙酸钠溶液（3.4）溶解并稀释至100mL，使用前现配。 4．6 邻苯二胺溶液：质量浓度200mg/L。称取20mg邻苯二胺，用水稀释至100mL，现用现配。 4．7 维生素C标准溶液：浓度100μg/mL。称取0.0500g抗坏血酸，用偏磷酸-乙酸溶液（3.2）溶解并稀释至50mL，取10mL该溶液用偏磷酸-乙酸溶液（3.2） 稀释至100mL，制成标准溶液。现用现配。 5. 仪器 ：荧光分光光度计。 6. 方法 6．1 样品处理 6．1．1 含淀粉的样品 准确称取5g样品于150mL三角瓶中，加入0.5g高峰氏淀粉酶（3.1），再加入15mL45～50℃的蒸馏水，混合均匀后，用氮气排除瓶中空气，盖上瓶塞，至45℃烘箱内30min，取出冷却至室温，用偏磷酸-乙酸溶液（3.2）转至100mL容量瓶内，定容。 6．1．2 不含淀粉的样品 准确称取2.5g样品，用偏磷酸-乙酸溶液（3.2）溶解，定容至50mL。 6．2 测定 6．2．1 将上述样液转至放有约1g酸性活性炭（3.3）的250mL三角瓶中，剧烈振动，过滤，弃去头几毫升滤液，然后分别吸取5mL样品及标准溶液的滤液分置于25mL及100mL放有5mL硼酸-乙酸钠溶液（3.5）的容量瓶中，静止15min后，用蒸馏水定容。以此作为标准溶液及样品的空白溶液。 6．2．2 在此15min内，吸取另5mL样品及标样于其他两个25ml及100mL放有5mL乙酸钠溶液（3.4）和约15mL水的容量瓶中，用水稀释至刻度。 6．2．3 分别吸取2mL的样品、标样及样品和标样的空白溶液于4支试管中。 6．2．4 向每支试管中加入5mL邻苯二胺（3.6），摇匀，在避光条件下放置35min后，立刻于激发波长350nm，发射波长430nm条件下测定其荧光值。 7. 结果计算 样品中维生素C含量（mg/100g）= 式中： I——样品荧光值； Ib——样品空白溶液荧光值； Is——标样荧光值； Isb——标样空白溶液荧光值； c——标样质量浓度，mg/mL； m——样品的质量，g。 8. 允许差 同一样品的两次测定值之差不得超过两次测定平均值的10%。