乳与乳制品微生物检验方法芽孢和耐热芽孢的检测.doc

乳与乳制品微生物检验方法芽孢和耐热芽孢的检测 YLNB 3.6 1. 术语 我们通常所指的耐热芽孢杆菌是指对灭菌温度或更高的温度具有极强的抵抗力的一组能够形成芽孢的细菌。 2. 仪器及器材 2.1 培养箱：30～35℃，50～55℃，； 2.2 恒温水浴锅：46±1℃，80±1℃， 100±1℃； 2.3 平皿：直径90mm； 2.4 试管，吸管； 2.5 广口瓶或三角烧瓶：容量为500ml； 2.6 温度计。 3. 培养基和试剂 3.1生理盐水(0.85%NaCL溶液) 3.2营养琼脂或孢子计数专用培养基 80℃ 80℃，水浴10min 报 告 菌落计数 每个皿内加入适量营养琼脂 选择2-3个适宜稀释度各以1ml分别加入灭菌平皿中 做成几个适当倍数的稀释液 检样 迅速冷却 4.1 芽孢总数的测定： 检验程序见下图 30～35℃ 72h 4.1.1 样品的前处理 4.1.1.1以无菌操作将5-10ml原奶样品加入一具塞灭菌试管内，在另一试管加入与奶等量的水，并在加水的试管中插入一根温度计。 4.1.1.2将两支试管同时放入80℃的恒温水浴中，待温度升至80℃后，保温10min。 4.1.2 样品的稀释及培养 4.1.2.1保温结束后，将含原奶的试管用冷水迅速冷却。 4.1.2.2根据样品的污染程度，选择2个适当的稀释度，分别做10倍递增稀释的同时，即取该稀释度的吸管移1ml稀释液与灭菌平皿内，每个稀释度做2个平皿。 4.1.2.3 稀释液移入平皿后，即使将凉至46℃的培养基注入平皿内，使其混合均匀。同时做空白对照实验。 4.1.2.4 待琼脂凝固后，翻转平板，置30-35℃培养箱下培养72h。 4.1.2.3.菌落计数方法参见菌落总数的计数方法。 4.1.2.4 菌落数的报告参见菌落总数的报告方式。 4.2 耐热芽孢总数的测定 检验程序见下图报 告 报 告 菌落计数 每个皿内加入适量琼脂 选择2-3个适宜稀释度各以1ml分别加入灭菌平皿，每个稀释度做4个平皿，分成2组 中，每个稀释度 做成几个适当倍数的稀释液 检样 迅速冷却 100 100℃，水浴10min 30～35℃ 72h 50～55℃ 72h 4.2.1样品的前处理 4.2.1.1以无菌操作将5～10ml原奶样品加入一具塞灭菌试管中，在另一试管加入与奶等量的水，并在加水的试管中插入一根温度计。 4.2.1.2将两支试管同时放入100℃的恒温水浴中，待温度升至100℃后，保温10min。如果水达不到100℃就沸腾，则等待时间需延长。或在水中加入盐以提高沸点温度，但要避免原奶样品沸腾。 4.2.2样品的稀释及培养 4.2.2.1保温结束后，将含原奶的试管用冷水迅速冷却。 4.2.2.2根据样品的污染程度，选择2个适当的稀释度，分别做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液与灭菌平皿内，每个稀释度做4个平皿，分成2组，每组2个平皿。 4.2.2.3稀释液移入平皿后，即将凉至46℃的培养基注入平皿内，使其混合均匀。同时做空白对照实验。 4.2.2.4待琼脂凝固后，翻转平板，将1组平皿置于30～35℃培养箱，另一组放入50～55℃培养箱内，均培养72h。 4.2.3菌落计数方法参见菌落总数的计数方法。 4.2.4菌落数的报告参见菌落总数的报告方式。 在30-35℃条件下培养的菌落数为耐热适中温菌的芽孢数，而在50-55℃条件下培养的菌落数为耐热嗜热型的芽孢数。计数两个温度下的总和为每毫升测试样品中的总耐热芽孢总数。