乳与乳制品微生物检验菌落总数的检测.doc

乳与乳制品微生物检验菌落总数的检测 YLNB 3.1 方法一： 1. 引用依据：GB/T4789.2-2003 2. 术语和定义 菌落总数是指食品检样经处理后，在一定条件下培养后（如营养成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等），所得1ml（g）检样中所生长的细菌菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有的生长条件不能满足其生理要求，故难以生长。因此菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数。 菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中的繁殖动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。 3. 仪器及器材 3.1 恒温培养箱：36±1℃； 3.2 冰箱：0～4℃； 3.3 恒温水浴锅：46±1℃； 3.4 天平； 3.5 电炉； 3.6 灭菌吸管； 3.7 灭菌广口瓶或三角瓶：容量为500ml； 3.8 玻璃珠：直径5mm； 3.9 灭菌平皿：直径约90mm； 3.10 灭菌试管； 3.11 放大镜； 3.12 菌落计数器； 3.13 酒精灯； 3.14 均质器或乳钵； 3.15 试管架； 3.16 灭菌刀或剪子； 3.17 灭菌镊子。 4. 培养基和试剂 4.1 营养琼脂培养基； 4.2 生理盐水； 4.3 75%乙醇溶液。 5. 检验程序 检样做成几个适当倍数的稀释液 检样 做成几个适当倍数的稀释液 报 告 菌落计数 选择2-3个适宜稀释度各以1ml分别加入灭菌平皿中 每个皿内加入适量营养琼脂 36±1℃ 48±2h 6. 方法 6.1 检样稀释及培养 6.1.1 以无菌操作将检样25g（或ml）剪碎放于装有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内，（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。 固体检样在加入稀释液后，最好置均质器中以8000～10000r/min的速度处理1min，做成1：10的均匀稀释液。 6.1.2 用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液）振摇试管，混合均匀，做成1：100的稀释液。 6.1.3 另取1ml灭菌吸管，按上述操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用一支1ml灭菌吸管。 6.1.4 根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内。 6.1.5 稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃的营养琼脂培养基（可放置于46±1℃水浴中保温）注入平皿约15ml，并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液的灭菌平皿内做空白对照。 6.1.6 待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃培养箱内培养48±2h。 注：如果怀疑样品中含有在琼脂培养基表面蔓延生长的菌落之，琼脂凝固后，可在表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），并在报告上记录该操作。 6.2 菌落计数方法 做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。 6.3 菌落计数的报告 6.3.1 平板菌落数的选择 选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数的测定标准，一个稀释度选用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而另一半菌落分布又很均匀，可计算半个平板后乘2代表全皿菌落数。平板内有链状菌落生长时（菌落之间无明显界限），若仅有一条链，可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。 6.3.2 稀释度的选择 6.3.2.1 应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之（见表中例1）。 6.3.2.2 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者的比值来确定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字，（见表中例2及3）。 6.3.2.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告（见表中例4）。 6.3.2.4若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告（见表中例5）。 6.3.2.5 若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告（见表中例6）。 6.3.