乳与乳制品非常规理化指标检验亚油酸DHAAA的检测.doc

乳与乳制品非常规理化指标检验亚油酸DHAAA的检测 YLNB 5.7 1. 范围 本方法规定了用气相色谱法测定亚油酸、DHA和AA的方法。 本方法适用于婴幼儿配方食品和乳粉中亚油酸、DHA和AA含量的测定。 2. 原理 抽提出样品内的脂肪，经甲基化反应后，以气相色谱，火焰离子化检测器定量测定样品中的亚油酸、DHA和AA的含量。 3. 试剂 所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。 3．1 高峰氏淀粉酶（Taka-Diastase）。 3．2 氨水：体积分数≤25%。 3．3 乙醇：体积分数≥95%。 3．4 乙醚。 3．5 石油醚：沸程，30～60℃。 3．6 正己烷：色谱纯。 3．7 氢氧化钾的甲醇溶液：c(KOH)为4mol/L，使用无水甲醇。 3．8 标准溶液 3.8.1 DHA 标准贮备液：将50mg DHA 标样用正己烷溶解并定容至50mL，此溶液溶度为1mg/ml,冷冻保存。 3.8.2 AA标准贮备液：将100mg AA 标样用正己烷溶解并定容至50mL，此溶液溶度为2mg/ml,冷冻保存。 3.8.3亚油酸标准贮备液：将1g亚油酸标样用正己烷溶解并定容至50mL，此溶液溶度为20mg/ml,冷冻保存。 3.8.3 DHA 标准工作液：取标准贮备液2.00mL，用正己烷烯释并定容至25mL。此溶液溶度为80ug/ml。 3.8.4 AA标准工作液：取标准贮备液1.00mL，用正己烷烯释并定容至25mL。此溶液溶度为80ug/ml。 3.8.5亚油酸标准工作液：取标准贮备液1.00mL，用正己烷烯释并定容至25mL。此溶液溶度为800ug/ml。 3.9 刚果红：1g刚果红溶于水中，稀释至100ml。 4. 仪器及器材 4．1 毛氏抽脂瓶。 4．2 离心机。 4．3 水浴锅。 4．4 振摇器。 4．5 气相色谱仪。 4．6 火焰离子化检测器。 4．7 色谱柱：DB-WAX，30m×0.25mm。 5. 方法 5．1 样品处理 5．1．1 含淀粉样品 准确称取1.0000g样品放入毛氏抽脂瓶中，加入0.1gTaka淀粉酶，再加入10mL45～50℃的蒸馏水，混合均匀后，用氮气排除瓶中空气，盖上瓶塞，置45℃烘箱内30min，取出冷却室温。 5．1．2 不含淀粉样品 准确称取样品约1.0000g，放入毛氏抽脂瓶（4.1）中，用10mL65℃的热水溶解，振摇，使样品完全分散，水冷却至室温。 5．2 测定液的制备 5．2．1 于上述样品溶液中加入2mL体积分数为25%的氨水（3.2），置于60-70℃水浴（3.3）中15min，取出轻摇，冷至室温。 5．2．2 加入10mL乙醇（3.3），两滴刚果红，混匀。加入25mL乙醚（3.4），塞上塞子振摇1min。再加入25mL石油醚，塞上塞子振摇1min。离心或静止，使醚层、水层分开。第二次提取加入的试剂为5mL乙醇、15mL乙醚、15mL石油醚，操作同前。第三次提取不加乙醇，用15mL乙醚、石油醚，如上操作。 5．2．3 把提取的醚液合并，水浴浓缩至近干，用正己烷溶解残留物并定容至10mL，摇匀。准确吸取2mL此液于10mL带盖离心管中，加入0.2mL氢氧化钾的甲醇溶液（3.7），振摇1min以上，放置30min（甲基化反应）。如果有机层混浊，可离心使之澄清。此有机层即为样品待测液。 5．3 测定 5．3．1 DHA、AA 测定条件 a） 进样器温度：260℃； b） 检测器(FID)温度：280℃； c） 进样体积：1.0μl； d） 分流比：1：15； e） 柱温：150℃(1分钟)-5℃/min-220℃(30分钟)； f） 柱压：130Kpa。 亚油酸的测定条件 a） 进样器温度：260℃； b） 检测器(FID)温度：280℃； c） 进样体积：1.0μl； d） 分流比：1：50； e） 柱温：150℃(1分钟)-3℃/min-220℃(15分钟)； f） 柱压：120Kpa。 5．3．2 定性测定 根据保留时间定性。 5．3．3 定量测定 外标定量法。 注射一定量的标准工作液进入气相色谱仪，得到标样的峰面积Ai； 注射等体积的样品待测液进入气相色谱仪，得到样品中各组分的峰面积Bi。 6. 结果计算 样品中各组分的含量（mg/100g）= 式中：