乳与乳制品微生物检验方法霉菌和酵母菌的计数.doc

乳与乳制品微生物检验方法霉菌和酵母菌的计数 YLNB 3.4 1、引用依据：GB/T4789.15-2003 2、仪器及器材 2.1 恒温培养箱：36±1℃； 2.2 冰箱：0-4℃； 2.3 恒温水浴锅：46±1℃； 2.4 天平； 2.5 显微镜； 2.6 均质器或乳钵； 2.7 灭菌平皿：直径90mm； 2.8 灭菌试管：18×180和20×200； 2.9 灭菌吸管：1 ml和10 ml； 2.10 灭菌广口瓶或三角烧瓶：容量为500ml； 2.11 灭菌玻璃珠：直径约5mm； 2.12 载玻片； 2.13 酒精灯； 2.14 试管架； 2.15 灭菌刀、剪子、灭菌镊子等。 3、 培养基和试剂 在霉菌和酵母计数中，主要使用以下几种选择性培养基。 3.1 马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基（PDA）：需加入适量抗菌素以抑制细菌； 3.2 孟加拉红（虎红）培养基； 3.3 高盐察氏培养基； 3.4 灭菌蒸馏水； 3.5 75%乙醇溶液。 4、 检验程序 检验程序如下： 吸取25ml,加225ml无菌水称取25g，加225ml无菌水 吸取25ml,加225ml无菌水 称取25g，加225ml无菌水 粮食 块状食品 粉状食品 液状食品 糊状食品 检样 吸取25ml,加225ml无菌水 称取25g，加225ml无菌水 粮食 块状食品 粉状食品 液状食品 糊状食品 检样 报告 报告 菌落计数 每皿加入适量培养基（可选用马铃薯—葡萄糖琼脂附加抗菌素、高盐察氏培养基，或孟加拉红培养基） 选择2~3个适宜稀释度，各以1ml加入灭菌平皿内 做成几个适当倍数的稀释度 25～28℃ 5d 5、 方法 5.1 以无菌操作称取检验25g(或25ml)，放入含有225ml灭菌水的玻赛三角瓶中，振摇30分钟，即为1：10稀释液。 5.2 用灭菌吸管吸取1：10稀释液10ml，注入试管中，用带橡皮乳头的1ml吸管反复吹吸50次，使霉菌孢子充分散开。 5.3 取1ml 1：10稀释液注入含有9ml灭菌水的试管中，另换一支1ml吸管吹吸5次，此液为1：100稀释液。 5.4 按上述操作顺序做10倍递增稀释液，每稀释一次，换用一支1ml吸管，根据对样品的污染程度，选择2～3个合适的稀释度，分别做10倍稀释的同时，吸取1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做2个平皿，然后将凉至45℃左右的培养基注入平皿内，待琼脂凝固后，翻转平板，将其置于25~28℃的培养箱中，3天后开始观察，共培养观察5天。 5.5 计数方法：通常选择菌落数在10~150之间的平皿进行计数，同一稀释度的两个平皿的菌落数的平均值乘以稀释倍数，即位每克或每毫升检验中所含霉菌和酵母菌数。关于稀释倍数的选择可参考细菌菌落总数测定。 5.6 报告：每克或每毫升食品所含霉菌和酵母菌以个/克（个/毫升）表示。