一个新地Wolbachia插入序列因子(WISE)地分离和鉴定.docxVIP

一个新的Wolbachia插入序列因子OⅥSE)的分离和鉴定 所有这些节肢动物细胞内寄生细菌均不能在体外培养的条件下存活， 这给对于这类微生物的研究，包括分类、生理等等带来了较大的困难。在 90年代初，随着分子生物学的发展，研究工作取得了较大进展。 0·Neill等人利用高温多聚酶链式反应(PCR)，成功地扩增了 Wolbachia的1 6S rRNA(1 8)。随后，研究者们利用PCR方法扩增、克 隆了多种细胞内寄生菌的169 rRNA，23S rRNA等基因片断并且进行了 序列测定，对于这些分子数据的系统发生分析表明cI细菌、雌性化因子 以及孤雌生殖诱导因子形成了～个单源发生的种群一Wolbachia(1 8—21) 。这一类的细菌在长期的与宿主相互作用过程中，进化出独特的生存机制 ，它们成了改变宿主动物的生殖和发育过程的专家。然而，由于1 6s rRNA基因的进化速度很慢，因此用这个基因无法区分Wolbachia的不同 品系。随后，Werren等用进化更快的细菌细胞循环基因ftsZ提高了 Wolbachia9支内的系统发生分辨率(22)。但是以上基因都不能用于解 决具有不同生殖表型的Wolbachia品系之间的系统发生关系，最近克隆 的编码Wolbachia主要外膜蛋白的基因wsp解决了这个问题，wsp基因是 目前已知的Wolbachia内多态性最高的基因，来自28个Wolbachia品系 的wsp基因序列的比较表明它们的差异可达23％，它也是目前已知的 Wolbachja基因中进化速度最快的基因，因而可用来对WolbachIa进行 最为精细的系统发生研究(23)。Zhou等基于已知的28个Wolbachia品 系的wsp的部分序列，设计了～系列的PCR引物来区分不周宿主来源的 Wolbachia，并为这些不同的品系进行了分组(2 4)。 尽管如此，目前对于Wolbachia的研究总体而言还不够深入，对 于它们与宿主作用的分子机制就更是知之甚少。目前已克隆、分离的数 个Wolbachia基因都缺乏与CI现象的直接联系。Wolbachia基因组 计划(Wolbachia Genome Project)已在进行之中，而且果蝇的全 基因组测序已经完成，这必将极大地推动对Wolbachia诱导的cI现 象分子机制的研究。 =尘堑塑竺竺壁塑堡垒堡型里至塑!璺堕坌壅塑些室 一 二．胞质不相容现象 军XV ， 早x《旱x， 旱x Cfr早×， 章x(；‘姜， !X， 仝X· 图一所示的是在二倍体生物中的情形，如果宿主的性别决定是二倍一 单倍体方式的话，相容的交配子代性比是正常的，而不相容的交配只产生 雄性后代(28)。此外，一种宿主可以被两种Wolbachia感染，这种超感 染相对于只感染两者之一的宿主表现出与图一A相同的不相容性状(29)。 迄今为止，对于WolbaG力iaCI作用的机制了解不多。较为普遍接受 的一种模型是“修饰一拯救”模型。根据这一模型，WolDac力ia修饰了 宿主的精子，而只有相同或相近品系的Wolbachia能在卵细胞中拯救这 种修饰作用。相应的生化模型是Wolbachia移走了精子染色体上的某些 蛋白质，父本染色体在受精后不能正常凝集，在第一次有丝分裂时不能正 常分配到两个子代细胞中去。在二倍体生物中，这种情形造成了胚胎致 二尘堑塑竺堡型塑堡垒坐型里三塑!!!堕坌塞塑鳖塞 一—— 死：而在二倍一单倍体性别决定的生物中，其表型则是子代全部或大部为 雄性。而如果卵细胞也被同种Wolbachi_童感染，Wolbachia也移走卵子 染色体上的同种蛋白质，父本、母本染色体的凝集同时滞后，第一次有丝 分裂在总体上也呈滞后状态，从而两套染色体都能正常分配到子代。而在 双向不相容交配中，由于雌雄个体感染了不同的Wolbachia，它们可能 移走了不同的染色体蛋白质，所以不同的Wolbachia不能拯救精子中的 修饰作用。Riparbelli等人的研究揭示了在不相容的交配中，来自父本 的染色体确实不能正常地与母本染色体同时凝集f 2 8)。 在利用了分子生物学手段进行分类分析以后，研究者们发现了一些不 能诱导cI的Wolbachia(3 0)。理论预测，Wolbachia可根据其诱导CI 以及拯救能力分为四类：1．ind+rec+，即能诱导C1也有拯救能力，2．in d+rec一，即只能诱导cI但不能拯救，3．ind—rec+，即不能诱导CI但有拯 救能力，4．ind—rec一，即不能诱导CI也不能拯救cI。其中ind+rec一在 进化上是不稳定的，因此很可能不能在自然群体中检测到。ind+rec+，i nd—rec一早期即被发现(31)，BourtiZ等人在最近的研究中终于发现了 ind—rec+的Wolbachia品系