血清丙氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定.doc

血清丙氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定 实验原理 国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法。 ALT LDH（乳酸脱氢酶）L-丙氨酸 + ?-酮戊二酸 丙酮酸 + L-谷氨酸 LDH（乳酸脱氢酶） 丙酮酸+ NADH + H+ L-乳酸 + NAD+ + H2O 加入磷酸吡哆醛（P-5-P）是为了稳定ALT活性，避免样品中因内源性磷酸吡哆醛不足造成测定结果假性偏低。(如心肌梗死、肝病和特别监护病人的结果)[1] 2. 标本： 2.1 病人准备：12小时禁食。 2.2 类型：血清，肝素或EDTA血浆。 3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：10%；15～25℃保存：17%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定4周。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。 5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂 奥林巴斯ALT测定试剂盒 试剂1 + 试剂2 6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.3变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.4 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。 6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪 8. 操作步骤 8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件 8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件 9. 检验结果的判断与分析 10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。 11. 计算方法：以TruCal U复合校准品ALT校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以U/L报告。 12. 参考值范围 [4] 不含磷酸吡哆醛 含磷酸吡哆醛 女性 31U/L 10～35U/L 男性 41U/L 10～50U/L 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。 13. 临床意义[1,2]：丙氨酸氨基转移酶（ALT）旧称谷丙转氨酶（GPT），天门冬氨酸氨基转移酶（AST）旧称谷草转氨酶（GOT）。它们是氨基转移酶类的典型代表。氨基转移酶催化氨基从氨基酸转移给?-酮酸的反应。ALT是肝脏的特异性酶，仅在肝胆疾病时显著升高。而AST水平的升高和心肌或骨骼肌损伤，以及肝组织损害等都有关。因此同时进行ALT和AST的检测，可用于鉴别肝损伤和心肌或骨骼肌损伤。AST/ALT比率用于肝病的鉴别诊断。比率1预示中度的肝损伤；比率1和严重肝病有关，常见慢性肝病。 14. 操作性能 14.1 线性范围 4～800U/L 14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU2700批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。 不含磷酸吡哆醛 批内 精密度 n=20 (U/L) s (U/L) CV (%) 天间 精密度 n=20 (U/L) s (U/L) CV (%) 样品1 22.8 0.70 3.08 样品1 22.2 1.38 6.22 样品2 42.6 0.68 1.60 样品2 44.8 1.17 2.62 样品3 99.3 0.92 0.92 样品3 101 1.02 1.00 含磷酸吡哆醛 批内 精密度 n=20 (U/L) s (U/L) CV (%) 批间 精密度 n=20 (U/L) s (U/L) CV (%) 样品1 33.3 0.99 2.96 样品1 33.8 1.25 3.71 样品2 72.1 1.36 1.88 样品2 72.0 2.04 2.83 样品3 133 1.76 1.32 样品3 128 2.77 2.16 14.3 方法学比较：不含磷酸吡哆醛 本公司不含磷酸吡哆醛的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对78个样品进行ALT活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x+0.00U/L；r=0.999