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ABO血型鉴定标准化操作规程 检测原理： 根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗-A和抗-B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。 标本采集与处理 2.1受检者的准备 病人不需空腹，根据病情随时可抽血检测。 2.2静脉采血 除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。 2.3 标本的处理 血标本室温放置30min～45min（或在37℃水温箱放置20分钟）后离心分离血清，置洁净试管加盖低温（4-8 3. 试剂和材料 3.1抗A、抗B血型定型试剂。（单克隆抗体） 3.2 献血员5%红细胞盐水悬液； 3.3 受检者血清； 3.4 受检者5%红细胞盐水悬液。 4.方法 4.1玻片法： 4.1.1取清洁玻片1张（或用白瓷板1块），用蜡笔标明抗-A、抗-B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B分型血清1滴，再各加受检者5%红细胞悬液1滴，混和。 4.1.2取洁净玻片一张（或白瓷板1块）用蜡笔标明A细胞、B细胞，然后分别滴加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B红细胞悬液1滴。将玻片不断轻轻转动，使分型血清与红细胞充分混匀。连续15min，以肉眼观察有无凝集（或溶血）反应。 4.2试管法 4.2.1 取洁净小试管2支，分别标明抗-A 和抗-B，分别滴加抗-A和抗-B分型血清各1滴于试管底部，再用滴管分别加入受检者5%红细胞悬液1滴，混和。 4.2.2 另取洁净小试管2支，分别表明A、B细胞。用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别滴加入A、B型5%试剂红细胞悬液1滴，混和。 4.2.3 立即以1000r/min离心5min。 4.2.4 将试管轻轻摇动，使沉于底部的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。 4.2.5 观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B的发现。 5. 结果判断 凡红细胞凝集成大块者，为凝集；仍分散着，为不凝集。凝集者用“+”表示，不凝集者，用“-”表示。 6. ABO血型正反定性结果，见下表 ABO血型正反定性结果表 分型血清+受检者红细胞 受检者血清+试验红细胞 受检者血型 抗-A+抗-B 抗-A 抗-B A型细胞+B型细胞 A型细胞 B型细胞 + + - A - - + + - + B - + - + - - O - + + + + + AB - - - 7.正反定型结果不一致的原7.1分型血清效价太低、亲和力不抗-A血清效价不高可将A亚型误定为O型，AB型误定为B型。 7.2红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显，误判为阴性反应。 7.3受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于白血病或恶性肿瘤）以及类B等。 7.4受检者血清中蛋白紊乱（高球蛋白血症）或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。 7.5受检者血清中缺乏应有的抗-A及/抗-B抗体，如丙种球蛋白缺乏症。 7.6各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集。部分溶血时，可溶 性血型物质中和了相应的抗体。 7.7由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。 7.8血清中有意外抗体，如自身抗-I，常引起干扰。 7.9老年人血清中抗体水平大幅度下降。 8、正反定型结果不一致的解决办法： 如发现ABO正反定型结果不一致，首先要重新作实验一次。严格执行操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察和解释试验结果，就可解决明显的问题，对一些疑难问题必须进一步研究。初步的检查步骤包括： 8.1另从受检者采取1份新鲜血液标本，这样可以纠正因污染或搞错样本造成的不符合。 8.2将红细胞洗涤数次，配成5%盐水细胞悬液，用抗-A、抗-B作试验可以得到其它有用的信息。 8.3对受检红细胞作直接抗球蛋白试验，如结果呈阳性，表示红细胞已被抗体致敏。 8.4用A、B、O红细胞及自身红细胞检查受检