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肝功能实验专题知识宣讲 目的要求： 1、掌握常用肝功能指标的检测方法； 2、掌握各项肝功能指标检测的临床意义。 一、赖氏法测定血清ALT 1、原理： α-酮戊二酸 + L-丙氨酸 ALT 丙酮酸 + L-谷氨酸 丙酮酸 + 2，4-二硝基苯肼 丙酮酸苯腙 丙酮酸苯腙色泽强度与样品中ALT含量成比例，在 510nm波长处比色可求得样品中ALT含量。 2、试剂： 1）基质液： α-酮戊二酸 2mmol/L L-丙氨酸 200mmol/L 。 2）显色剂： 2，4-二硝基苯肼 1mmol/L 3）NaOH： 4mol/L 4）标准原液：丙酮酸钠 3mmol/L(标准原液1mL加0.5ml蒸馏水成浓度为2.0mmol/L标准液) 5）样 品：新鲜血清 3、操作：1）标准曲线的制作 0 1 2 3 4 蒸馏水（ μl ） 50 50 50 50 50 标准液（ μl ） 0 25 50 75 100 基质液（ μl ） 250 225 200 175 150 相当于酶活力U/L — 28 57 97 150 显色剂 （μl） 250 250 250 250 250 混匀，37℃恒温20min NaOH （μl） 2500 2500 2500 2500 2500 混匀，室温3min，510nm波长，以“0”号管调零，测定各管的吸光值绘制工作曲线。 2）：样品测定 混匀，室温3min，510nm波长，以空白管调零，测定各管的吸光值。 空白（B） 测定（U） 样 品（ μl ） — 50 蒸馏水（ μl ） 50 — 基质液（ μl ） 250 250 混匀，37℃恒温30min 显色剂（ μl ） 250 250 混匀，37℃恒温20min NaOH （ μl ） 2500 2500 4、计算： 以各个标准管活力单位为横坐标，吸光度变化值为纵坐标，绘制工作曲线图。即可以查阅样品ALT活性。 参考值范围：5～40U/L 5、注意事项： 1）标本要求：严重溶血、脂血及黄疸会影响比色； 2）试剂避免污染。 6、临床意义： 1）血清ALT浓度降低： 2）血清ALT浓度升高: 二、重氮法测定血清总胆红素 1、原理： 总胆红素+对氨基苯磺酸+亚硝酸盐 偶氮胆红素色泽强度与样品中TB含量成比例，在578nm波长处比色可求得样品中TB含量。 二甲基亚砜 酸性环境 紫色偶氮胆红素 2、试剂： 1）R1试剂： 无水对氨基苯磺酸 32mmol/L 二甲基亚砜 70mmol/L 盐酸 1.0mol/L 2）R2显色剂：亚硝酸钠 29.0mmol/L 3）标 准 液：复合胆红素标准液 20umol/L 4）样 品：新鲜血清 备注： 工作试剂的配制：取R1 10ml加R2 0.2ml混合均匀，即为工作试剂。 2）：样品测定 混匀， 37℃温育6min，578nm波长，以空白管调零，测定各管的吸光值。备注：标准管直接吸入比色。 加入物 （ml） 空白管(B) 测定管(U) dH2O 0.1 － 标准液 － － 待测血清 － 0.1 工作液 1.5 1.5 4、计算： 血清总胆红素含量（umol/L）＝AU/AS*标准浓度 参考范围：2-18 umol/L 5、注意事项： 1）标本要求：严重溶血、脂血会影响检测结果； 2）试剂避光保存 6、临床意义： 1）血清TB浓度降低： 2）血清TB浓度升高: 三、重氮法测定血清直接胆红素 1、原理： 直接胆红素+对氨基苯磺酸+亚硝酸盐 偶氮胆红素色泽强度与样品中DB含量成比例，在578nm波长处比色可求得样品中DB含量。 酸性环境 紫色偶氮胆红素 2、试剂： 1）R1 试 剂：无水对氨基苯磺酸 32mmol/L 盐酸 1mol/L 2）R2显色剂：亚硝酸钠 29mmol/L 3）标 准 液：复合胆红素标准液 20umol/L 4）样 品：新鲜血清 备注： 工作试剂的配制：取R1 10ml加R2 0.2ml混合均匀，即为工作试剂。 2）：样品测定 混匀， 37