鞣质含量测定标准操作规程.doc

鞣质含量测定标准操作规程 1 简述 1985年版至2000年版中国药典一部鞣质含量测定法一直沿用皮粉法，虽适用范围广，但存在耗样量多，测定时间长，且没有选择性，测定结果偏高，皮粉用量大等缺点。近年来，皮粉试剂的供应和质量都很难保证，使皮粉法的应用受到限制。中国药典2005年版一部修改为磷钼钨酸-干酪素紫外-可见分光广度法。 2 仪器与用具 2.1 紫外可见光分光度计。 2.2 量瓶、移液管、具塞锥形瓶。 3 试药与试液 3.1 没食子酸对照品 3.2磷酸、盐酸（分析纯）。 3.3 干酪素（生化试剂）。 3.4 磷钼钨酸试液 应符合中国药典2005年版一部附录ⅩⅤ B的规定。 3.5 29%碳酸钠溶液 取碳酸钠（NaCO3·H2O）29Ghuo 无水碳酸钠10.8g加水100ml溶解。 4 操作方法 本实验应避光操作。 4.1 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品50mg，置100ml棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含没食子酸0.05mg）。 4.2 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置25ml棕色量瓶中，各加入磷钼钨酸试液1ml，再分别加水11.5ml、11ml、10ml、9ml、8ml、7ml，用29%碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（附录Ⅴ A），在760nm的波长处测定吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。 4.3 供试品溶液的制备 按各品种项下规定的量取样，精密称定，置250ml棕色量瓶中，加水150ml，放置过夜，超声处理10分钟，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，静置（使固体物沉淀），滤过，弃去初滤液50ml，精密量取续滤液20ml，置100ml棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。 4.4 测定法 4.4.1 总酚 精密量取供试品溶液2ml，置25ml棕色量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1ml”起，加水10ml，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量（mg），计算，即得。 4.4.2 不被吸附的多酚 精密量取供试品溶液25ml，加至已盛有干酪素0.6g的100ml具塞锥形瓶中，密塞，置30℃水浴中保温1小时，时时振摇，取出，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2ml，置25ml棕色量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1ml”起，加水10ml，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量（mg），计算，即得。 5 记录与计算 5.1 记录对照品、供试品的称样量，测定过程供试品溶液稀释、量取的体积等；标准曲线的制备中对照品溶液的量取体积以及相应的吸光度值，计算回归方程。 5.2 分别按标准曲线法计算总酚量和不被吸附的多酚量，两者之差为鞣质含量。即： 鞣质含量=总酚量－不被吸附的多酚量 6 注意事项 6.1 药材一般应粉碎过三号筛； 6.2 显色溶液在30分钟后反应完全，在3小时内稳定。因此，规定显色后放置30分钟后测定吸光度。