吸收放散试验标准操作规程.doc

吸收放散试验标准操作规程 (一)检验目的 检测红细胞表面可能存在的弱血型抗原、鉴定、分离血清中可能存在的混合抗体，辅助红细胞血型及混合抗体特异性的鉴定。 (二)检验原理 抗体与相应抗原在适合条件下可以发生凝集或致敏，但这种结合是可逆的，如果改变某些物理条件时，抗体可以从结合的红细胞上解脱下来。表达弱血型抗原(A或B等)的红细胞与相应抗体反应不出现凝集现象，但可以吸收相应的抗体，被吸收的抗体在适当条件下可以放散出来，与具有对应正常抗原的红细胞发生反应，检测和鉴定该放散出来的抗体，可以证明相应抗原的存在，也可以将混合抗体得到分离。 (三)适用范围 1.弱血型抗原的鉴定(本操作规程主要选取弱A／B抗原鉴定制定相应试验流程)。 2.混合血型抗体的分离与鉴定。 3.新生儿溶血病的诊断。 (四)设备性能参数 参见KA-2200血清学专用离心机、B600-A型离心机、电热恒温水浴箱使用说明书。 (五)器材与试剂 1.器材 B600-A型离心机、KA-2200台式离心机、电热恒温水浴箱、塑料软试管、塑料硬质试管(75mm×l2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。 2.试剂 生理盐水、抗A和抗B标准血清(经过筛选后)、抗人球蛋白试剂(市售单克隆或多克隆)、3％反定试剂红细胞。 (六)标本要求 抗凝全血经B600-A型离心机在1 760g条件下，离心5分钟后压积红细胞应≥2ml。 (七)校准步骤 参见KA-2200血清学专用离心机、B600-A型离心机、电热恒温水浴箱使用说明书中校准要求执行。 (八)操作程序 1.吸收试验 (1)生理盐水洗涤lml压积红细胞至少3遍，最后1次洗涤后，尽量弃去试管中红细胞沉淀上的所有上清盐水。 (2)如怀疑是弱A(或弱B)抗原红细胞，在洗涤后的红细胞中加入lml抗A(或抗B)血清。 (3)将红细胞与抗体试剂充分混匀，在4℃条件下孵育2小时，期间不时轻摇试管，混合红细胞与抗体血清。 (4)使用B600-A型离心机在1 760g条件下，离心5分钟，将所有上清(抗A或抗B试剂)转移到另一支试管中。 (5)将红细胞转移到另一支洁净试管中，用较大体积4℃生理盐水洗涤红细胞至少8遍。保存最后一遍洗涤离心后的上清液，使用3％反定细胞检测其中是否残留游离抗体，如果有应继续洗涤，直至没有游离抗体存在。 (6)将与红细胞反应后的上清液与其对应的血清原液同步进行倍比稀释，测定其抗体效价的’变化，具体操作参照《ABO及Rh血型抗体效价测定试验标准操作规程》。 2.热放散试验 (1)取吸收后并经洗涤的1体积压积红细胞(对于只做放散试验用来证实红细胞表面是否结合抗体的情况，用生理盐水将其红细胞充分洗涤4～6次制备成洗涤后压积红细胞)加等体积的生理盐水，置56℃水浴10分钟，其间不断振摇，然后在预温的离心管中以2 000g，离心1分钟，立即将上层红色放散液转移到另一试管中。 (2)取上清放散液分成3份，于标有A、B、O的试管中，分别加入相应的A、B、O试剂红细胞各1滴，直接离心观察结果。对于阴性结果，需将试管置37℃水浴30分钟，用生理盐水洗涤3次，最后一次控干上清液，然后在各管中加1滴抗人球蛋白试剂，使用血清学专用离心机在1 000g条件下，离心15秒，判读结果。也可采用凝聚胺法或卡式抗人球法检测。 3.乙醚放散试验 (1)取经洗涤4～6次的受检者压积红细胞1体积，另取1体积生理盐水和2体积乙醚，加入到带塞的玻璃大试管内，剧烈振荡1～2分钟，然后以B600-A白洋离心机在1 760g条件下，离心1分钟。 (2)离心后分成3层，上层是乙醚，中间是红细胞基质，下层是具有抗体的放散液，呈深红色。 (3)用吸管吸出下层放散液，置37℃水浴10分钟，除尽乙醚。 (4)再次离心，取上清液即为放散液。 (5)用经典抗人球法或卡式抗人球法检测乙醚放散液。 4.检验结果的输入与确认 (1)启动“检验程序”，输入用户名及口令后，进入检验程序。 (2)单击“检验”菜单，选择“检验结果录入＼修改”，通过申请序号进行检验结果的录入及修改。 (3)检验结果的确认：检验结果应由实验室负责人或授权人员进行确认，方法为单击“结果处理”菜单，选择“报告确认”进入结果确认，通过选择“工作单元”“报告日期”“单张”或“批量”后，按“提取”键提取已经传输或录入的检验结果，经两人核对无误后按“确认”键进行确认。 (九)质量控制 1.室内质量控制 参照《手工抗人球蛋白试验标准操作