不规则抗体筛查标准操作规程.doc

不规则抗体筛查标准操作规程 (一)检验目的 检测受血者、孕妇等血清中是否存在抗A、抗B以外的不规则抗体，为交叉配血、ABO血型正确定型(不规则抗体干扰反定型)以及新生儿溶血病产前、产后诊断提供参考依据。 (二)检验原理 1.盐水介质法 IgM类不规则抗体可以在室温盐水介质中发生凝集反应，使用手工试管法就可以判断受检者血液中是否存在IgM类不规则抗体。 2.凝聚胺法 利用多聚季胺盐类——凝聚胺携带很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，引起正常红细胞可逆性凝集。无抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，当加入中和液后，则凝集消散，而被不规则抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，则不能消散，以此来判断受检者血液中是否存在不规则抗体。 3.微柱凝胶法 微柱凝胶卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗人球蛋白试剂，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶上端，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。 4.玻璃珠微柱法 微柱卡的每一个微管中装填有直径均一的玻璃微珠和抗人球蛋白试剂(抗-IgG和抗补体C3)，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，而未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。 (三)适用范围 适用于手工凝聚胺法、手工微柱凝胶法、手工玻璃珠微柱法、全自动微柱凝胶法、全自动玻璃珠微柱法不规则抗体筛查及鉴定试验。 (四)设备性能参数 各种用于不规则抗体筛查试验的检测系统性能指标参见相应说明书。 (五)器材与试剂 1.器材 KA-2200血清学专用离心机、B600-A型低速离心机、WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro Au-toVuelnnova全自动血型配血系统、阅片灯箱、卡式专用离心机、孵育器、塑料软试管、塑料硬质试管(75mm×l2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、移液器、一次性移液枪头。 2.试剂 Diana DG Gel Coombs卡、DiaMed Coombs卡、Othro BioVue Coombs卡、生理盐水、凝聚胺配套试剂(LIM液、Re-suspending液、Polybrene液)专用稀释液(DII.2、DG GEL sol或BLISS液)、3系3％抗筛细胞、3系1％抗筛细胞、10系或16系1％鉴定谱细胞(可由3％鉴定谱细胞经专用稀释液稀释获得)。 (六)样本要求 EDTA-K2或EDTA-K3：抗凝静脉血≥3ml，经B600-A型离心机在1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血及明显乳糜。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。 (七)校准步骤 各类全自动血型检测系统的校准操作过程分别见《WADiana全自动血型配血系统标准操作规程胍SWING-SAXO血型配血系统标准操作规程》《Techno全自动血型配血系统标准操作规程》《Othro AutoVue lnnova全自动血型配血系统标准操作规程》。 (八)操作程序 1.盐水介质法不规则抗体筛查及鉴定操作程序 (1)取4支洁净硬质试管分别做好标记I、Ⅱ、Ⅲ、自身对照。 (2)每支试管中分别加入患者血浆(或血清)2滴，再加入相应3％I、Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞和自身红细胞各1滴并混匀。 (3)使用血清学专用离心机在1 000g条件下离心15秒。 (4)结果判定：一系或多系红细胞发生凝集，自身对照不凝集的判断为阳性，提示存在IgM类不规则抗体。 2.手工凝聚胺法不规则抗体筛查及鉴定操作程序 (1)取3支洁净硬质试管分别做好标记I、Ⅱ、Ⅲ。 (2)每支试管中分别加入患者血浆(或血清)2滴，再加入相应3％I、Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞1滴并混匀。 (3)在每支试管中加入低离子液(LIM)0.65ml及聚凝胺(Polybrene)试剂2滴混匀，血清学专用离心机在1 000g条件下，离心15秒。 (4)离心后弃上清，不要沥干，观察细胞扣，轻轻振摇，如果有凝集现象则加入重悬液2滴，拖拉辗转，1分钟内观察结果：3管中任意1管或多管出现凝集者为抗体筛选阳性，应进一步使用10系或16系谱细胞鉴定抗体的特异性，操作方法与筛查试验相同，